尼康顯微鏡三頻激發(fā)塊DAPI-FITC-TRITC的介紹

紫外線和尼康DAPI-FITC-TRITC濾波器組合可見光透射光譜曲線下面示于圖1.該濾波器集合時在施加設(shè)計的DAPI，F(xiàn)ITC（異硫氰酸熒光素），和TRITC（四甲基異硫氰酸酯）探針的Zui佳檢測組合，并采用一個激發(fā)濾光器與窄帶通窗中的紫外線（385至400納米），藍(lán)色（475?490納米），綠（545至565納米）的頻譜區(qū)。

三發(fā)射（阻擋）濾波器的帶通區(qū)域允許檢測的藍(lán)，綠，和橙紅色發(fā)射從Zui多同時3熒光染料。透射和反射帶的每一個過濾器，并應(yīng)用具有選擇為互補的發(fā)射和激發(fā)波長的多個帶通透射區(qū)域一個二色鏡之間的尖銳過渡，使三頻帶信號檢測以Zui小的交叉，干擾和噪聲。

三重激發(fā)濾波器模塊DAPI-FITC-TRITC產(chǎn)品規(guī)格：

• 激發(fā)波長篩選：385-400納米（帶通，393 CWL），475-490納米（帶通，483 CWL）和545-565納米（帶通，555 CWL）

• 二色鏡波長：435-470納米（帶通），500-540毫微米（帶通），和570-645納米（帶通）

• 屏障過濾波長：450-465納米（帶通，458 CWL），505-535納米（帶通，520 CWL）和580-620納米（帶通，600 CWL）

在DAPI-FITC-TRITC三重帶熒光濾波器組合被用于同時檢測所述熒光染料DAPI，F(xiàn)ITC和TRITC具有Zui小交叉的專門設(shè)計（光譜泄放通）相鄰帶之間，并且它也可以與熒光的其它組合采用具有類似的光譜曲線探針。?濾波器組的短波長信號的信道將選擇狹義的光譜區(qū)為紫色激發(fā)和藍(lán)色發(fā)光檢測;?第二，波長較長的信道對應(yīng)于藍(lán)色激發(fā)綠色發(fā)光檢測，以及綠色激發(fā)耦合到橙紅色發(fā)射構(gòu)成濾波器集合的第三頻帶。?短波長激發(fā)傳輸?shù)拇笮?，以提供藍(lán)色發(fā)光的更好的平衡與其他熒光信號，同時也盡量減少漂白刻意降低。?研究從以下三組選擇熒光團(tuán)的各種組合時，此濾波器組建議：DAPI，藍(lán)色熒光蛋白（BFP）或Hoechst 染料（紫色激發(fā)）;FITC，綠色熒光蛋白（GFP），的Cy2，或Alexa Fluor 488（藍(lán)色激發(fā)）;?TRITC，紅色熒光蛋白，Cy3的，將Alexa Fluor 546，或美圖跟蹤紅CMXRos（綠色激發(fā)）。?在圖2中呈現(xiàn)的圖像表明該過濾器設(shè)置有多種針對不同細(xì)胞內(nèi)位置的熒光探針組合的性能。

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圖2（a）所示的熒光發(fā)射從沾有MitoTracker紅CMXRos，將Alexa Fluor 488共軛鬼筆環(huán)肽和DAPI人骨肉瘤細(xì)胞（U-2線），其中針對細(xì)胞內(nèi)的線粒體的網(wǎng)絡(luò)，細(xì)胞骨架肌動蛋白絲的文化，核上。?的可見光Zui大吸收MitoTracker紅CMXRos的是579納米，并且Zui大發(fā)射發(fā)生在599納米，而對于將Alexa Fluor 488的相應(yīng)的值是495和519納米。?注意在這四個子細(xì)胞，其清楚地表明通過高信號電平的所有三個用于染色的樣品中的熒光團(tuán)的存在顯著的對稱性。

大鼠的皮膚組織的一個薄的部分染色DNA和糖蛋白用DAPI和四甲基羅丹明（TMR）綴合到小麥胚芽凝集素，分別示于圖2（b）。?紫外光吸收Zui大值的DAPI的是358納米，并且在可見光發(fā)射Zui大值發(fā)生在461納米，而對于TMR相應(yīng)值是550和573納米。?另外，將試樣同時標(biāo)記的Alexa Fluor 488綴合至鬼筆環(huán)肽（靶向肌動蛋白網(wǎng)絡(luò);綠色發(fā)光）。?注意兩個重疊和離散信號的來自所有三個這些熒光團(tuán)的存在。(奧林巴斯顯微鏡)

從牛肺動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)物被認(rèn)為免疫熒光標(biāo)記的同隨后山羊綴合BODIPY FL抗小鼠Fab片段初級抗牛的α-微管蛋白的小鼠單克隆抗體的熒光發(fā)射強度在圖2（c）所示。?將細(xì)胞培養(yǎng)物同時沾上德克薩斯紅鬼筆環(huán)肽和DAPI，靶向的細(xì)胞骨架肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)和DNA在細(xì)胞核中，分別。?可見光Zui大吸收的BODIPY FL的是505納米，并且Zui大發(fā)射發(fā)生在513納米，而對于德克薩斯紅的相應(yīng)值是595和620納米。

精選于圖2（d）是一個薄的小鼠腸沾上的Alexa Fluor 350麥胚凝集素，藍(lán)色熒光的凝集素特定于杯狀細(xì)胞的粘液部分。?另外，將試樣同時沾上的Alexa Fluor 568鬼筆環(huán)肽（絲狀肌動蛋白; 600納米發(fā)射）和SYTOX綠（核; 504納米激發(fā)和523納米發(fā)射）。?注意信號從藍(lán)色熒光團(tuán)（Alexa Fluor 350）的存在下，以及作為核在組織標(biāo)本由于SYTOX綠的明亮的綠色熒光，并且橙紅色熒光（Alexa Fluor 568）從肌動蛋白絲在刷邊框。

沾有MitoTracker紅CMXRos和Alexa Fluor 488綴合鬼筆環(huán)肽正常人肺成纖維細(xì)胞（MRC-5線），其靶向細(xì)胞內(nèi)的線粒體的網(wǎng)絡(luò)和細(xì)胞骨架的肌動蛋白絲，分別示于圖2（e）所示。?另外，將試樣同時用DAPI染色（在細(xì)胞核靶向DNA;紫外線激發(fā)的藍(lán)色發(fā)光）。?注意相對平衡，高信號電平的所有三個用于染色的樣品中的熒光團(tuán)的存在。

由薄麥粒的截面自發(fā)熒光發(fā)射強度（?小麥?）的組織中演示了圖2（f）所示。?在植物組織中的內(nèi)源性的自發(fā)熒光產(chǎn)生于各種生物分子，包括木質(zhì)素，葉綠素，β-胡蘿卜素，葉黃素和。?在藍(lán)色和綠色的激發(fā)區(qū)域，葉綠素具有吸收帶，具有高消光系數(shù)，并產(chǎn)生一個顯著量熒光在與450和550納米之間的波長激發(fā)。?其他的內(nèi)源性熒光團(tuán)通過紫外線與該過濾器組合激發(fā)。?對于以上所示的麥粒組織，注意自發(fā)熒光發(fā)射強度中的藍(lán)，綠，和紅光譜區(qū)域的存在，這是尼康DAPI-FITC-TRITC熒光濾波器組合的特性。