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      顯微制片技巧

      http://m.hkxccw.cn 來(lái)源:原創(chuàng) 日期:2011-7-5 9:17:18




        顯微制片技巧

         一、粉末制片法

        1.粉末的制備

        選取有代表性的樣品適量,剪成長(zhǎng)約0.1cm的小段,置50~60℃的烘箱中干燥(含揮發(fā)油的藥材溫度應(yīng)更低,把持在30~40℃),然后用粉碎器粉碎,常用的粉碎器有沖窩、鐵碾、微型粉碎機(jī)等。粉碎后的粉末過(guò)50~60目篩,成藥則應(yīng)過(guò)100目篩,置清潔的瓶中備用。

        制備粉末時(shí)應(yīng)注意不得有其它的雜物混入,樣品應(yīng)全體過(guò)篩,不得留有殘?jiān)鼦壢。^(guò)篩后的粉末需充足混勻方可裝片。

        2.制片方法

        依據(jù)須要不同,可作成臨時(shí)或永久制片。

       ?。?) 臨時(shí)制片:作臨時(shí)觀察用,隨用隨作,通常僅能保留1~2周。直接封片法 不經(jīng)任何處理,直接用于封藏液裝片后即可視察。常用的封躲液有如下幾種:

        a. 水:常用蒸餾水。用于觀察淀粉粒等多糖類物質(zhì),但易引起淀粉粒膨脹變形,欲測(cè)定粉粒大小時(shí)不宜用水作封藏劑。 b.稀甘油:用于觀察糊粉粒、淀粉粒及其它多糖類物質(zhì),為顯微制片中Zui常用的封藏劑。經(jīng)水合氯醛透化的電影多加稀甘油一滴,還可防止水合氯醛結(jié)晶的析出。配制時(shí)應(yīng)注意冬氣象溫低,粘度小,裝片時(shí)易產(chǎn)賭氣泡,可適當(dāng)配濃一點(diǎn),而夏天則相反,可配稀一點(diǎn)。 c. 50%甘油酒精:適用范疇同上,透明度較上者強(qiáng)。 d.甘油醋酸液:專用于觀察淀粉粒的形態(tài),是目前觀察淀粉粒Zui幻想的封藏劑,可使淀粉粒堅(jiān)持本來(lái)的狀況而不膨脹變形,便于測(cè)定其大小。 e. 乙醇:主要用于觀察菊糖及橙皮柑結(jié)晶。因乙醇易揮發(fā),故裝片后應(yīng)立即觀察,放置稍久則乙醇揮發(fā)產(chǎn)生大批汽泡。 f. 水合氯醛:一般作為透明劑,在觀察菊糖時(shí),用其作為封藏液,不加熱,裝片后立即觀察,往往能得到比乙醇裝片更為幻想的后果。方法:取干凈載玻片,滴加封藏劑1~2滴,用解剖針或火柴桿挑取粉末少許與封藏劑混勻,然后用鑷子夾住蓋玻片的邊沿中部或用食指及拇指拿住蓋玻片的邊沿,將其一側(cè)邊緣壓在封藏液旁的載玻片上,慢慢放下至程度地位,用濾紙屑干凈載片即可。

        裝片過(guò)程中應(yīng)注意封藏液要適量,若不足則封藏液不能充斥蓋片;過(guò)多則溢出蓋片,使蓋玻片浮動(dòng),并易將封藏液溢到蓋玻片上面。蓋玻片上面應(yīng)干燥,不得將封藏液溢到上面,否則會(huì)污染物鏡,并下降蓋玻片的透明度,若已弄到蓋片上面,則只能洗后重新裝片,不得擦后委曲觀察。

        若封藏液不足未充斥蓋片,可在蓋片一側(cè)邊沿的載片上滴加少量的封藏液;若封藏液過(guò)多溢出蓋片或引起蓋片浮動(dòng),則用小濾紙條從一側(cè)面汲取過(guò)多的封藏液,使蓋片緊貼載片,不再浮動(dòng)。

        在蓋片進(jìn)程中,常因不熟練或不注意而在電影中留下氣泡,可用解剖針將蓋玻片一側(cè)挑起,再輕輕放下,以除往氣泡。另外,有的封躲液黏度較大(如甘油),不易滲透到細(xì)胞組織中,常在厚壁細(xì)胞腔中留下氣泡,若先用少量乙醇潤(rùn)濕粉末,再滴加封藏劑裝片,則可打消氣泡。

        水合氯醛透化妝片 用水合氯醛加熱處理除去粉末中所含的淀粉粒、葉綠素、樹脂、蛋白質(zhì)、油脂、色素、揮發(fā)油等物資,并使細(xì)胞膨脹、透明,以利于細(xì)胞及組織的視察。方式如下:

        取水合氯醛溶液1~2滴于載玻片上,挑取粉末少許,混勻,于酒精燈上微熱透化,并以解剖針攪拌,彌補(bǔ)2~3次水合氯醛溶液(勿使溶液蒸干)透化好后加稀甘油1~2滴混雜,蓋片,肅清蓋玻片四周過(guò)剩的藥液。

       ?。?) 特別處理制片a.漂白:若粉末中色素太多,色澤太暗,不便觀察時(shí),可預(yù)先用漂白劑浸漬處理,再以沸水及冷水洗滌,離心分離,然后挑取粉末適量,按前述方法制片。常用的漂白劑有過(guò)氧化氫、氯化堿液(碳酸鈉與漂白粉混雜而成)等。

        b.脫脂:一些含脂肪較多的中藥(如種子類中藥),即使用水合氯醛透化也不便觀察,可預(yù)先進(jìn)行脫脂,然后再按一般方法制片觀察。脫脂方法有兩種,一種是將粉末放于兩層濾紙間擠壓以去油脂,另一種是將粉末用某些溶劑(氯仿、乙醇-乙醚混合液等)浸漬處理。

        c.解離:若粉末木化組織較多,細(xì)胞彼此不易分離時(shí),可用5%氫氧化鉀浸泡幾小時(shí)或在水浴中加熱浸漬,使組織崩解后在制片觀察。

       ?。?)永久制片:粉末永久制片方法較多,這里僅簡(jiǎn)略先容離心管操作法制片。

        脫水 取粉末0.3~0.5g,置離心管中,分步參加各級(jí)濃度的酒精進(jìn)行脫水,每步三分鐘,用細(xì)玻璃攪拌,每次均用離心機(jī)沉淀,傾去酒精,各級(jí)酒精濃度依次為30%、50%、70%。

        染色 于70%酒精脫水后的粉末中參加番紅染液劑,攪勻,染色30min,花類、葉類及單子葉植物藥材可將染色時(shí)光縮短為10~15min。離心分別,去上層染液,沉淀用70%酒精洗滌。染好的粉末逐步用80%、95%、100%的酒精脫水,每步5min。

        透明與封片 粉末逐步用25%、50%、75%、100%的二甲苯透明,每步3min,攪拌,離心分別。去上層二甲苯液,速參加加拿大樹膠(預(yù)先用二乙苯溶化好)約0.5~1ml,用玻棒攪拌均勻。用吸管汲取一滴于載玻片上,加蓋玻片封藏,并貼上標(biāo)簽,低溫防塵干燥即可。

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        中藥顯微化學(xué)鑒別法

        顯微化學(xué)是一種極敏銳的定性化學(xué)鑒別方法,由于應(yīng)用了顯微鏡,故能夠觀察到在肉眼看來(lái)幾乎是完全隱藏的反應(yīng),從而大大增添了反應(yīng)的敏銳度,正確地檢討出顯微組織切片中一系列不同地物質(zhì),這是一般化學(xué)鑒定方法所不能做到的。通常顯微化學(xué)的方法都是極其簡(jiǎn)略、精練,同時(shí)又是確實(shí)可信的。中藥顯微化學(xué)辨別即是應(yīng)用顯微化學(xué)的辦法來(lái)決議細(xì)胞壁及其內(nèi)含物的化學(xué)物資,或辨別組織構(gòu)造,從而到達(dá)鑒別中藥的目標(biāo)。

        一、 試驗(yàn)方式

        1.藥材切片或粉末實(shí)驗(yàn)法

        將藥材切片或粉末置于載玻片上,滴加適當(dāng)試液,加蓋玻片,在顯微鏡下觀察發(fā)生的結(jié)晶或沉淀,以及特別的顏色反應(yīng)等。若為切片,還須要觀察反應(yīng)的部位,用確認(rèn)加入反應(yīng)的成分在組織中的散布。

        供作實(shí)驗(yàn)的切片一般是用徒手切片。切片應(yīng)稍厚,約在20~40um之間,若太薄則可能因所要察看的內(nèi)容物含量太少,而不易顯示出明晰的成果。對(duì)于干藥材,切片前常需經(jīng)過(guò)各種軟化處置,但應(yīng)注意,所進(jìn)行的處理應(yīng)對(duì)要檢查的成分無(wú)影響,如檢討菊糖或粘液質(zhì)時(shí)不能用水處理,檢查揮發(fā)油時(shí)不能用高濃度的乙醇或蒸煮法處理,檢查鐘乳體不能用醋酸處理。

        2.浸出液實(shí)驗(yàn)法(顯微結(jié)晶法)

        取藥材粗粉加適當(dāng)溶劑浸漬,用吸管汲取浸出液,滴加一滴于清潔的載玻片上,在其旁邊再滴加反應(yīng)劑一滴,用玻棒尖端溝通此兩滴溶液,注意勿攪和此溶液(若直接將試劑加到浸出液上,則可能因反應(yīng)過(guò)快而析出極細(xì)小的結(jié)晶),放置片刻,加蓋玻片,于顯微鏡下觀察兩滴溶液接觸處形成的結(jié)晶,注意結(jié)晶的形狀及顏色。

        3.微量升華法

        應(yīng)用中藥中所含的某些化學(xué)成分在必定溫度下能升華的性質(zhì),獲得升華物,在顯微鏡下察看升華物得外形、色彩等。必要時(shí)可用顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀測(cè)定結(jié)晶得熔點(diǎn)。此外,還可以進(jìn)行一些化學(xué)反映,作為辨別特點(diǎn)。

        辦法:取一與載玻片大小雷同的金屬片,放在有圓孔的石棉板上,金屬片上放一高約0.8cm,直徑約1.5cm的小金屬圈,對(duì)準(zhǔn)石棉板的圓孔。圈內(nèi)放藥材粉末適量,展成一均勻薄層,圈上放一載玻片。在石棉板圓孔下用酒精燈緩緩加熱,至粉末開端變焦,載玻片上有升華物凝結(jié)時(shí),去火冷卻。取下載玻片,反轉(zhuǎn)后放于顯微鏡下觀察或加適當(dāng)化學(xué)試劑,觀察其變更。對(duì)于含水分較多的藥材。則應(yīng)為稍加熱,待水分揮發(fā)后再蓋上載玻片,獲取升華物。

        若沒有以上裝備,可改用一簡(jiǎn)化方式:即在一載玻片上放上藥材粉末,展成一薄層,在載玻片兩端各方一段小玻棒或火柴桿,再蓋上一載玻片,下面用酒精燈加熱升華。

        1.細(xì)胞壁

        植物細(xì)胞壁重要組成是纖維素,它形成了細(xì)胞壁的框架。由于環(huán)境的影響及細(xì)胞生理性能的不同,在纖維素框架中經(jīng)常存積有其他物資,使細(xì)胞壁產(chǎn)生各種不同的特化,如木質(zhì)化、木栓化、角質(zhì)化、粘液化、硅質(zhì)化、幾丁質(zhì)化等。

        (1)纖維素細(xì)胞壁:在纖維素細(xì)胞壁中,纖維素常與半纖維素同時(shí)存在。纖維素是一種化學(xué)性質(zhì)比擬穩(wěn)固,能耐酸、堿及其他多種溶劑的多糖類物質(zhì),由鏈狀系列的葡萄糖基通過(guò)氧原子的相互聯(lián)合而成。從構(gòu)型上來(lái)看,纖維素很像直鏈淀粉,但纖維素的單糖單位為β-葡萄糖,且分子量較淀粉大。

        細(xì)胞壁纖維素框架的基礎(chǔ)組成單位是一些是非不等的鏈狀纖維素分子,這些分子有規(guī)矩地平行排列,集合在一起,稱微團(tuán)。由微團(tuán)組成一種絲狀的微團(tuán)體系,稱微纖絲,這種構(gòu)造可在電子顯微鏡中看到。微纖絲又湊集成較粗的纖絲,稱為大纖絲,大纖絲在光學(xué)顯微鏡中即能看到。由于纖維素分子有規(guī)矩的排列成晶格狀,使纖維素細(xì)胞壁具有相似晶體的性質(zhì),在偏光顯微鏡下可顯出強(qiáng)烈的各向異性。

        纖維素細(xì)胞壁常見的顯微化學(xué)反應(yīng)有如下幾種。

        銅氨溶液反應(yīng) 于材料中加新配制的銅氨溶液,纖維素細(xì)胞壁逐漸膨脹而后溶解。纖維素在一般溶劑中都不溶解,但可溶于銅氨溶液。

        碘-硫酸反應(yīng) 滴加一滴1%碘液于材料中,再加一滴66.5%硫酸,纖維素細(xì)胞壁呈藍(lán)色,細(xì)胞壁中纖維素越多,其他成分愈少,則反應(yīng)愈顯明,對(duì)于木質(zhì)化強(qiáng)烈的細(xì)胞壁,反應(yīng)被掩飾不能看出。

        氯化鋅碘液反應(yīng) 材料加氯化鋅碘液一滴,纖維素細(xì)胞壁被染成紫色(木化或栓化細(xì)胞壁被染成黃色或棕色)。此為目前檢查纖維素細(xì)胞壁Zui常用的反應(yīng),在大多數(shù)情形下,氯化鋅碘液較碘-硫酸更為有效。

        (2)木質(zhì)化細(xì)胞壁:木質(zhì)化細(xì)胞壁是由于細(xì)胞壁纖維素框架中沉積了大批木質(zhì)素所致。木質(zhì)素是丙酸苯脂類的一種聚合物,由于它的沉積,可使細(xì)胞堅(jiān)硬堅(jiān)固,增添植物支撐重力的才能。

        木質(zhì)化細(xì)胞壁常用的顯微化學(xué)反應(yīng)有如下幾種:

        硫酸苯胺反映 加硫酸苯胺試液一滴,木質(zhì)化細(xì)胞壁被染成鮮艷姜黃色。為了避免細(xì)胞中含的草酸鈣結(jié)晶被溶解,可改用醋酸苯胺試液,亦顯黃色。這種色彩較為穩(wěn)固,可制成永久制片。

        間苯三酚反響 加間苯三酚1~2滴使資料濕潤(rùn),稍放置或微熱后,加濃鹽酸一滴,木質(zhì)化細(xì)胞壁被染成紅色或紫紅色。色彩的深淺視木化水平而定。此為檢討木質(zhì)化細(xì)胞壁Zui常用的反映。有時(shí)但用鹽酸即可使細(xì)胞壁發(fā)生紅色或紫紅色,這表明細(xì)胞壁本身就含有間苯三酚類化合物。

        高錳酸鹽反響 將切片放入盛有1%高錳酸鹽的小杯中放置5分鐘,切片被染成棕色。倒出溶液,換水洗滌切片,將切片移至稀鹽酸中至幾乎完整褪色為止。取出用凈水洗滌,置于載玻片上,滴加一滴氨液,木質(zhì)化細(xì)胞壁呈鮮紅色。這種反應(yīng)對(duì)雙子葉植物十分顯明,對(duì)裸子植物的組織不起反應(yīng),單子葉植物往往只能發(fā)生黑褐色。

        (3)木栓化和角質(zhì)化細(xì)胞壁:木栓化喝角質(zhì)化分辨是在細(xì)胞壁中滲透了木栓質(zhì)或角質(zhì)的成果,通常是植物維護(hù)組織細(xì)胞壁所具有的特化情勢(shì)。木栓質(zhì)和角質(zhì)均為高分子脂肪酸的聚合物,二者性質(zhì)類似,其顯微化學(xué)反響亦基礎(chǔ)一致。

        氯化鋅碘液反應(yīng) 木栓化及角質(zhì)化細(xì)胞壁被染成黃色或棕色。木質(zhì)化細(xì)胞亦能顯同樣的顏色,但切片若預(yù)先用次氯酸鈉消毒液處理1~2小時(shí),則木栓化及角質(zhì)化細(xì)胞壁染成黃色,木質(zhì)化細(xì)胞壁染成紫色。

        蘇丹紅Ⅲ染色 切片加蘇丹紅Ⅲ試液,稍放置或微熱,木栓化及角質(zhì)化細(xì)胞壁均顯桔紅色、紅色或紫紅色。再加20%氫氧化鈉,呈,加熱則木栓質(zhì)溶解呈黃色滴狀,而角質(zhì)化細(xì)胞壁不轉(zhuǎn)變外形。

       ?。?)粘液化細(xì)胞:為細(xì)胞壁中纖維素等成分產(chǎn)生變更而成為粘液,此粘液在細(xì)胞表面常呈固態(tài),吸水膨脹后則成粘滯狀況。粘液化細(xì)胞壁遇玫紅酸鈉醇溶液呈玫瑰紅色,遇釕紅試液呈紅色。

       ?。?)礦質(zhì)化細(xì)胞壁:細(xì)胞壁中沉積了硅質(zhì)或鈣質(zhì)所致,其中以硅質(zhì)(二氧化硅)為常見,硅質(zhì)不溶于醋酸、硫酸或硝酸,可溶于氫氟酸中。

       ?。?)幾丁質(zhì)化細(xì)胞壁:幾丁質(zhì)為β-1,4乙酰膠基葡萄糖型直鏈多糖,存在于低等植物細(xì)胞壁中,此種細(xì)胞壁常被誤以為纖維素細(xì)胞壁,但其折色光性強(qiáng),不與氯化鋅碘液反應(yīng)。

        切片加50%堿性溶液,在160~170℃下加熱一小時(shí),幾丁質(zhì)分解,分解產(chǎn)物可溶于3%的醋酸溶液中。

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        中藥顯微技巧-2 徒手切片法

        二、徒手切片法

        徒手切片法重要用于臨時(shí)制片。因切片進(jìn)程中沒有經(jīng)過(guò)龐雜的化學(xué)處置,可以真實(shí)地反應(yīng)植物細(xì)胞、組織的原來(lái)面目,在顯微化學(xué)及一般的構(gòu)造察看中極為有用,因此必需熟練控制這么技巧。

        1.切片工具

       ?。?)切片刀:一般使用普通的有柄剃刀,這種刀使用時(shí)間較長(zhǎng),每次用前在磨刀上磨至銳利即可。若沒有剃刀,也可用刀片取代,市售刀片有單面合雙面兩種,以單面刀片為好,特殊是切較硬的材料。

        (2)培育皿:用于盛片,切片前先裝適量清水(對(duì)較堅(jiān)硬的材料)或30%乙醇(對(duì)較柔軟或含黏液、菊糖等的材料),乙醇濃度也可更高,但不易超過(guò)50%,否則易引起細(xì)胞壓縮。

       ?。?)羊毫:用于取片,小楷和中楷毛筆均可。

       ?。?)切片板:木板或玻板,壓切法用之。

       ?。?)夾持物:夾持物應(yīng)是牢固而易切的材料,常用的有萵苣、蘿卜、土豆等,用于夾持柔軟的材料,如葉、花瓣及細(xì)小的須根,接骨木髓、通草等,適用的范疇同前。通草遇水即軟,故不能與水接觸,可將其保存在酒精中作切片,對(duì)于在酒精中保存的材料,用通草作夾持物甚好;軟木或杉木,用于較硬的材料假如實(shí)、種子類,用前需軟化。

        2.材料的軟化

        對(duì)于新穎的材料,多數(shù)無(wú)需軟化即能進(jìn)行切片,但中藥大多數(shù)都為干材料,切片前必需經(jīng)過(guò)軟化處理。軟化的方法較多,使用時(shí)應(yīng)依據(jù)材料的性質(zhì)加以選擇。

        (1)熱水浸泡法:將材料放入60℃左右的溫水中浸泡數(shù)小時(shí)即可。本法實(shí)用于纖細(xì)的根莖及根、全草、葉、花等質(zhì)軟而細(xì)薄的材料。

       ?。?)水煮法:材料放入沸水中煮一段時(shí)間,軟后取出。本法適用于較硬的根、根莖、莖木類,皮類等材料。對(duì)于特殊堅(jiān)硬的材料可放入壓力鍋中煮,若采取驟冷驟熱的方法(材料在沸水中煮一段時(shí)間,取出投入冷水中冷卻,再投入沸水中煮,如此重復(fù)進(jìn)行,直至軟化),可縮短軟化時(shí)間。

        (3)醋酸煮沸軟化法:材料置5%醋酸水溶液中,于微火上煮沸數(shù)小時(shí)候后,再換清水煮或溫浸至材料全體透軟而醋酸味即可。本法適用于堅(jiān)硬的木化材料。注意勿使煮沸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)否則材料漲裂。

       ?。?)甘油蒸煮法:材料用甘油浸泡后,將材料連同甘油一起放進(jìn)隔水鍋中蒸煮,直至軟化。本法應(yīng)用于堅(jiān)硬的木化資料。

       ?。?)濕氣密封法:取玻璃干燥器一個(gè),于干燥器底部放溫水約至2/3高(不放干燥劑),但不的超過(guò)孔磁板,于磁板上展一層濕潤(rùn)的紗布,將材料切成小塊,放在紗布上,加蓋密閉,然后將干燥器放在溫箱內(nèi),保溫45℃左右(若在夏天則不必放在溫箱內(nèi)),一般經(jīng)過(guò)2~10天即可軟化。本法軟化時(shí)間較長(zhǎng),但它能保證細(xì)胞內(nèi)含物的完全,使細(xì)胞內(nèi)含物不會(huì)因洗滌、升華或過(guò)火膨脹、粘液化等現(xiàn)象而受喪失。對(duì)于作顯微化學(xué)研討,特殊是含淀粉粒、菊糖、粘液質(zhì)等的材料的軟化尤為主要。

       ?。?)甘油-酒精軟化法:材料先用水煮,除去內(nèi)部氣體,以免妨害軟化劑的滲透。冷卻后投入50%的甘油-酒精等量混合液中浸泡數(shù)天至數(shù)星期,直至軟化。

       ?。?)氫氟酸軟化法:材料先用驟冷驟熱法處置2~3個(gè)小時(shí),冷卻后放進(jìn)市售濃度的氫氟酸(37%~40%)與水各半混雜液中,經(jīng)一個(gè)星期至一個(gè)月左右可軟化完整。本法應(yīng)用于某些極硬的材料(假如實(shí)、種子類藥材)的軟化。

        3.切片 軟化好的材料經(jīng)分割成適當(dāng)?shù)拇笮『蠹纯汕衅?,切片辦法有如下幾種:

       ?。?)手執(zhí)法:用左手拇指和食指夾住材料,并用中指托著,使材料略高出拇指和食指,右手持刀,使刀刃與材料的的切面平行,移動(dòng)右臂,以稍微均勻的動(dòng)作斜斜向后拉切。切片進(jìn)程中不得造成短促而續(xù)斷的動(dòng)作,更不得往返拉切,標(biāo)本必需一次切下,否則將得到厚薄不均得切片。刀刃及材料切面應(yīng)經(jīng)常用水或30%乙醇潤(rùn)濕,以防止材料的干縮以及避免切的薄片粘在刀刃上不易取下。切片用蘸水或30%乙醇的羊毫從刀背拂下,放入培育皿中。

       ?。?)夾持法:取夾持物切成恰當(dāng)大小,然后縱向剖開(但不完整切開),將材料夾入,再按前法即夾持物和材料同時(shí)切下,除往夾持物即可。本法實(shí)用于葉片、花瓣、渺小的須根等質(zhì)軟而不便手執(zhí)的材料。對(duì)于渺小的果實(shí)、種子類藥材,應(yīng)將夾持物完全剖開,并在中心挖一個(gè)小洞,放進(jìn)材料,再合上夾持物進(jìn)行切片。

        (3)壓切法:將材料放于切片板上,以左手中指及食指輕輕壓住材料,右手持刀自左向右或自上而下均勻用力切削。本法所用切片以單面刀片為好。切片過(guò)程中應(yīng)盡量避免刀刃與板相撞。本法對(duì)于渺小的果實(shí)、種子類,以及某些較硬的材料尤為實(shí)用。

        4.裝片

        用羊毫挑取透明的薄片(外形并不請(qǐng)求十分完全),放于載玻片中心,于低倍鏡下視察(不用蓋玻片),若切片充足透明,可以看清個(gè)別細(xì)胞,則取下滴加1~2滴封藏劑或水合氯醛透化后再加封躲劑,蓋上蓋玻片即可。

        [樓主] [4樓] 作者:水點(diǎn)點(diǎn). 發(fā)表時(shí)間: 2009/01/07 12:57

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        三.表面制片法

        1.材料的預(yù)處理

       ?。?)鮮材料:用刀片剪下所需的部位,成恰當(dāng)大小,用凈水沖刷一次。若不馬上用,可泡于30%酒精中防腐保留。

       ?。?)干藥材:先用冷水浸,再用溫水浸,必要時(shí)可煮沸,至能展開恢復(fù)原樣即可。若是較硬的材料(假如實(shí)類),還經(jīng)過(guò)軟化處理。然后分割成適當(dāng)大小。

        2.方法

        (1)撕取法:一般用于表皮易于剝離的葉的表皮制片。

        取出資料,認(rèn)清高低表面,用刀片在表面輕輕劃一刀(不能劃斷葉片),或從上面等分地將葉往下折迭,再用下鑷子從裂縫處撕取表皮。對(duì)于表皮不易與葉肉組織分別的,可借助刀片,邊撕邊切割。撕得的表皮置于載玻片中心,表皮的外表面朝上,用銳利的刀片切往帶綠色葉肉部分的表皮,加稀甘油封片即可。

       ?。?)削取法:對(duì)于表皮難于剝離的材料(如多數(shù)植物葉的上表皮、果實(shí)的外表皮、草質(zhì)莖的表皮等)可采取削取法。

        用左手拿住材料,右手持刀(與徒手切片雷同),使刀與材料表面平行,移動(dòng)右臂,輕輕切削,得表面一層薄片。放于載玻片中央,切割成適當(dāng)大小,加水合氯醛透化處理,然后以稀甘油裝片即可。

       ?。?) 解離法:重要用于表面不易剝離的葉的表面制片。

        將材料切割成恰當(dāng)大小,放入5%KOH(或NaOH)溶液中浸泡1~2日,也可稍加熱以縮短時(shí)光,至表皮易于剝離時(shí),取出。用凈水沖刷2~3次,再照撕取法制片。

       ?。?)整體透化封固法:適用于扁平而薄,難于撕取表面的葉片、花被片等的表面制片。

        將材料切割成適當(dāng)大?。?.5×0.5cm)的小塊,置于載玻片中心,用水合氯醛透化處理,至材料透明后用稀甘油裝片即可

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