顯微鏡,顯微鏡價(jià)格,顯微鏡的價(jià)格

　　微生物實(shí)驗(yàn)集錦

　　顯微鏡的應(yīng)用

　　應(yīng)用自然光源鏡檢時(shí)，Zui好用朝北的光源，不宜3采用直射陽光；利用人工光源時(shí)，宜用日光燈的光源。

　　　　鏡檢時(shí)身材要正對(duì)實(shí)習(xí)臺(tái)，采用端正的姿勢(shì)，兩眼自然張開，左眼觀察標(biāo)本，右眼觀察記載及繪圖，同時(shí)左手調(diào)節(jié)焦距，使物象清楚并移動(dòng)標(biāo)本視野。右手記載、繪圖。

　　　　鏡檢時(shí)載物臺(tái)不可傾斜，由于當(dāng)在五套載物臺(tái)傾斜時(shí)，液體或油易流出，既破壞了標(biāo)本，又污染載物臺(tái)，也影響檢討成果。

　　　　鏡檢時(shí)應(yīng)將標(biāo)本按必定方向移動(dòng)視野，直至全部標(biāo)本觀察完畢，以便不漏檢，不反復(fù)。

　　　　顯微鏡的重光為對(duì)光，接物鏡的轉(zhuǎn)換及光線的調(diào)節(jié)。觀察寄生蟲標(biāo)本時(shí)，光線調(diào)節(jié)甚為主要。由于所觀察的標(biāo)本如蟲卵、包囊等，均為自然光狀況的物體，有大有小，色澤有深有淺，有的無色透明，而低倍、高倍接物鏡轉(zhuǎn)換較多，故須隨著鏡檢時(shí)對(duì)不同標(biāo)本和請(qǐng)求，須要隨時(shí)調(diào)節(jié)焦距和光線，這樣才干使觀察的物象清晰。在一般情況下，染色標(biāo)本光線宜強(qiáng)，無色或未染色標(biāo)本光線宜弱；低倍鏡觀察光線宜弱，高倍鏡觀察光線宜強(qiáng)。

　　　　1． 對(duì)光：

　　　　（1）將低倍鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方與鏡筒成一直線。

　　　?。?）撥動(dòng)反光鏡，調(diào)節(jié)至視野Zui亮無暗影。反光鏡有平、凹兩面，光源強(qiáng)時(shí)用平面，較暗時(shí)用凹面，需要強(qiáng)光時(shí)，將聚光器提高，光圈放大；需要弱光時(shí)，將聚光器下降，或光圈恰當(dāng)縮小。

　　　?。?）將待察看的標(biāo)本置載物臺(tái)上，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒降落至接物鏡接近標(biāo)本。于轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器的同時(shí)，須俯身在鏡旁細(xì)心視察接物鏡與標(biāo)本之間的間隔。

　　　　（4）左眼于接目鏡觀察，同時(shí)左手轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)，使鏡筒漸漸上升以調(diào)節(jié)焦距，使視野內(nèi)的物象看到上時(shí)即停，再調(diào)微調(diào)節(jié)器，至標(biāo)本清楚為止。

　　　　2． 接物鏡的使用及光線的調(diào)節(jié)：

　　　　顯微鏡一般具有三個(gè)接物鏡，即低倍、高倍及油鏡，固定于接物鏡轉(zhuǎn)換盤孔中。觀察標(biāo)本時(shí)，先使用低倍接物鏡，此時(shí)，視野較大，標(biāo)本較易查出，但放大倍數(shù)較?。ㄒ话惴糯?00倍），較小的物體不易觀察其結(jié)構(gòu)。高倍接物鏡放大的倍數(shù)較大（一般放大400倍），能觀察渺小的物體或結(jié)構(gòu)。

　　　　寄生蟲的蠕蟲卵，微絲蚴，原蟲的滋養(yǎng)體及包囊，昆蟲的幼蟲，均使用低、高倍鏡。組織細(xì)胞內(nèi)的原蟲，則使用油鏡。使用低、高倍鏡觀察，如在低倍鏡下不能正確鑒定所見的物體或其內(nèi)部結(jié)構(gòu)時(shí)，則轉(zhuǎn)高倍鏡觀察。使用油鏡觀察，一般加一滴油后直接將油鏡頭浸進(jìn)油滴中進(jìn)行鏡檢觀察。

　　　　3． 低倍、高倍、油鏡頭的辨認(rèn)：

　　　?。?）標(biāo)明放大倍數(shù)10×，40×，100×，或10/0.25，40/0.65，100/1.30。

　　　?。?）低倍鏡Zui短，高倍鏡較長(zhǎng)，油鏡Zui長(zhǎng)。

　　　　（3）鏡頭前面的鏡孔低倍鏡Zui大，高倍鏡較大，油鏡Zui小。

　　　?。?）油鏡頭上常刻有玄色環(huán)圈，或“油”字。

　　　　4． 低倍鏡換高倍鏡的使用辦法：

　　　?。?）光線對(duì)好后，移動(dòng)推動(dòng)器尋找須要觀察的標(biāo)本。

　　　　（2）如標(biāo)本的體積較大，不能明白查見其結(jié)構(gòu)因而不能確認(rèn)時(shí)，則將標(biāo)本移至視野中央，再旋轉(zhuǎn)高倍接物鏡于鏡筒下方。

　　　?。?）旋轉(zhuǎn)微調(diào)節(jié)器至物象清晰為止。

　　　?。?）調(diào)節(jié)聚光器及光圈，使視野內(nèi)的物象到達(dá)Zui清楚的水平。

　　　　5． 油鏡的使用方式：

　　　　（1）原理：使用油鏡觀察時(shí)，需加香柏油，因?yàn)橛顽R需要進(jìn)入鏡頭的光線多，但油鏡的透氣孔Zui小，這樣進(jìn)入的光線就少，物體不易看明白。同時(shí)又因自玻片透過的光線，由于介質(zhì)（玻片－空氣－接物鏡）密度（玻片：n=1.52，空氣：n=1.0）不同而產(chǎn)生了折射散光，因此射入鏡頭的光線就更少，物體更看不清晰。于是采用一種和玻片折光率相接近的介質(zhì)如香柏油，加于標(biāo)本與玻片之間，使光線不通過空氣，這樣射入鏡頭的光線就較多，物象就看得明白（圖2）。

　　　　（2）油鏡的使用：

　　　　a．將光線調(diào)至Zui強(qiáng)程度（聚光器進(jìn)步，光圈全體開放）。

　　　　b．轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒上升，滴香柏油1小滴（不要過多，不要涂開）于接物鏡正下方標(biāo)本上。

　　　　c．轉(zhuǎn)動(dòng)接物鏡轉(zhuǎn)換盤，使油鏡頭于鏡筒下方。

　　　　d．俯身鏡旁側(cè)面在肉眼的觀察下，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使油鏡頭徐徐降落浸入香柏油內(nèi)，輕輕接觸玻片為止。

　　　　e．慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使油鏡頭漸漸上升至見到標(biāo)本的物象為止。

　　　　f．轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)節(jié)器，使視野物象到達(dá)Zui清晰的程度。

　　　　g．左手漸漸移動(dòng)推動(dòng)器，并轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)節(jié)器以觀察標(biāo)本。

　　　　h．標(biāo)本觀察完畢后，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器將鏡筒升起，取下標(biāo)本玻片。立即用擦鏡紙將鏡頭上的香柏油擦凈。

　　　　6． 注意事項(xiàng)：

　　　?。?）使用顯微鏡之前，應(yīng)熟習(xí)顯微鏡的各部名稱及使用方法，特殊應(yīng)控制辨認(rèn)三種接物鏡之特點(diǎn)。

　　　?。?）寄生蟲學(xué)實(shí)習(xí)中所觀察的標(biāo)本，大多數(shù)為無色和顏色較淺，因此必須注意光線的調(diào)節(jié)。

　　　　（3）新穎標(biāo)本觀察時(shí)，須加蓋玻片，以免標(biāo)本因蒸發(fā)而干燥變形或污染侵蝕接物鏡，同時(shí)可使標(biāo)本表面勻平，光線得以集中，有利于觀察。

　　　　（三） 顯微鏡的頤養(yǎng)

　　　　圖3 加用蓋玻片后，標(biāo)本表面勻平，光線得以集中，便于檢討示意圖

　　　　1．顯微鏡在從木箱中取出或裝箱時(shí)，右手緊握鏡臂，左手穩(wěn)托鏡座，輕輕取出。不要只用一只手提取，以防顯微鏡墜落，然后輕輕放在實(shí)習(xí)臺(tái)上或裝入木箱內(nèi)。

　　　　2．顯微鏡放到實(shí)習(xí)臺(tái)上時(shí)，先放鏡座的一端，再將鏡座全體放穩(wěn)，切不可使鏡座全面同時(shí)與臺(tái)面接觸，這樣震撼過大，透鏡和微調(diào)節(jié)器的裝置易破壞。

　　　　3．顯微鏡須經(jīng)常堅(jiān)持干凈，勿使油污和灰塵附著。如透鏡部分不潔時(shí)，用擦鏡紙輕擦，如有油污，先將擦鏡紙蘸少許二甲苯拭去。

　　　　4．顯微鏡不能在陽光下暴曬和使用。

　　　　5．接目鏡和接物鏡不要隨意抽出和卸下必須抽取接目鏡時(shí)，須將鏡筒上口凈用布遮蓋，避免灰塵落入鏡筒內(nèi)。調(diào)換接物鏡時(shí)，卸下后應(yīng)顛倒在干凈的臺(tái)面下，并隨即裝入木箱的置放接物鏡的管內(nèi)。

　　　　6．顯微鏡用完后，取下標(biāo)本片，經(jīng)聚光器降下，再將物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒降落，以免接物鏡與聚光器相碰。

　　7．顯微鏡應(yīng)放在干燥的處所，以防生霉。

　　經(jīng)常性的保護(hù)

　　　?。ǎ保┓莱奔偃缡覂?nèi)濕潤(rùn)，光學(xué)鏡片就輕易生霉、生霧。鏡片一旦生霉，很難除去。顯微鏡內(nèi)部的鏡片由于不便擦拭，濕潤(rùn)對(duì)其迫害性更大。機(jī)械零件受潮后，輕易生銹。為了防潮，寄存顯微鏡時(shí)，除了選擇干燥的房間外，寄存地點(diǎn)也應(yīng)離墻、離地、闊別濕源。顯微鏡箱內(nèi)應(yīng)放置１～２袋硅膠作干燥劑。并經(jīng)常對(duì)硅膠進(jìn)行烘烤。在其顏色變粉紅后，應(yīng)及時(shí)烘烤，烘烤后再持續(xù)使用。

　　　?。ǎ玻┓缐m光學(xué)元件表面落入灰塵，不僅影響光線通過，而且經(jīng)光學(xué)體系放大后，會(huì)天生很大的污斑，影響觀察。灰塵、砂粒落入機(jī)械部分，還會(huì)增添磨損，引起活動(dòng)受阻，迫害同樣很大。因此，必須經(jīng)常堅(jiān)持顯微鏡的干凈。

　　　　（３）防腐化 顯微鏡不能和具有腐化性的化學(xué)試劑放在一起。如硫酸、鹽酸、強(qiáng)堿等。

　?。ǎ矗┓罒?防熱的目標(biāo)主要是為了避免熱脹冷縮引起鏡片的開膠與脫落。

　　革蘭氏染色法

　　革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中普遍使用的一種辨別染色法，1884年由丹麥醫(yī)師、細(xì)菌學(xué)家 Christain Gram創(chuàng)建。

　　　　細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶染色，而經(jīng)碘液媒染后，用酒精脫色，在必定條件下有的細(xì)菌此色不被脫去，有的可被脫往，因此可把細(xì)菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽性菌（G+），后者為革蘭氏陰性菌（G?）。為觀察便利，脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅、稀釋復(fù)紅等進(jìn)行復(fù)染。陽性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和盡大多數(shù)的球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反映；弧菌，螺旋體和大多數(shù)致病性的無芽胞桿菌都浮現(xiàn)負(fù)反響。革蘭氏陽性菌對(duì)青霉素敏感，革蘭氏陰性菌對(duì)鏈霉素敏感?？梢罁?jù)革蘭氏染色法辨別不同菌種并對(duì)癥下藥。

　　　　革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學(xué)組成和生理性質(zhì)上有很多差異，染色反響不一樣?，F(xiàn)在一般以為革蘭氏陽性菌體內(nèi)含有特別的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物聯(lián)合很牢，不易脫色，陰性菌復(fù)合物聯(lián)合水平底，吸附染料差，易脫色，這是染色反映的重要根據(jù)。另外，陽性菌菌體等電點(diǎn)較陰性菌為低，在雷同PH條件下進(jìn)行染色，陽性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫往，陰性菌則相反。所以染色時(shí)的條件要嚴(yán)格節(jié)制。例如，在強(qiáng)堿的條件下進(jìn)行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反響；PH很低時(shí)，則可都呈負(fù)反應(yīng)。此外，兩類菌的細(xì)胞壁等對(duì)結(jié)晶紫?碘復(fù)合物的通透性也不一致，陽性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時(shí)光，脫色辦法也應(yīng)嚴(yán)厲把持。

　　染色原理

　　　　G?菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性障，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖脫水而孔障縮小，故保存結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上。呈紫色。

　　　　Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)疏松，乙醇脫色不能使其構(gòu)造壓縮，其脂含量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，沙黃復(fù)染后呈紅色。

　　操作流程

　　　　革蘭氏染色法一般包含初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作辦法是：

　　　?。保┩科潭āＴ跓o菌操作條件下，用接種環(huán)挑取少量細(xì)菌于清潔的載玻片上涂布均勻，固定。

　　　?。玻┎菟徜@結(jié)晶紫染1分鐘。

　　　　３）自來水沖刷，去掉浮色。

　　　?。? 用碘-碘化鉀溶液媒染1分鐘，傾去過剩溶液。

　　　?。担┯弥行悦撋珓┤缫掖迹?5%）或丙酮酸脫色30秒，革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色，革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色。

　　　?。叮┯棉t染液復(fù)染30秒，革蘭氏陽性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則浮現(xiàn)紅色。革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌即被差別開。

　　大腸菌群的測(cè)定

　　大腸菌群并非細(xì)菌學(xué)分類命名，而是衛(wèi)生細(xì)菌范疇的用語，它不代表某一個(gè)或某一屬細(xì)菌，而指的是具有某些特征的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完整一致，其定義為：需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。一般以為該菌群細(xì)菌可包含大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。

　　簡(jiǎn)介

　　　　大腸菌群散布較廣，在溫血?jiǎng)游锛S便和自然界廣泛存在。調(diào)查研討表明，大腸菌群細(xì)菌多存在于溫血?jiǎng)游锛S便、人類經(jīng)常運(yùn)動(dòng)的場(chǎng)合以及有糞便污染的處所，人、畜糞便對(duì)外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因。糞便中多以典型大腸桿菌為主，而外界環(huán)境中則以大腸菌群其他型別較多。

　　　　大腸菌群是作為糞便污染指標(biāo)菌提出來的，重要是以該菌群的檢出情形來表現(xiàn)食品中有否糞便污染。大腸菌群數(shù)的高下，表明了糞便污染的程度，也反應(yīng)了對(duì)人體健康迫害性的大小。糞便是人類腸道排泄物，其中有健康人糞便，也有腸道患者或帶菌者的糞便，所以糞便內(nèi)除一般正常細(xì)菌外，同時(shí)也會(huì)有一些腸道致病菌存在（如沙門氏菌、志賀氏菌等），因而食品中有糞便污染，則可以推測(cè)該食品中存在著腸道致病菌污染的可能性，埋伏著食品中毒和風(fēng)行病的要挾，必須看作對(duì)人體健康具有潛在的危險(xiǎn)性。

　　　　大腸菌群是評(píng)價(jià)食品衛(wèi)生質(zhì)量的主要指標(biāo)之一，目前已被國(guó)內(nèi)外普遍利用于食品衛(wèi)生工作中。

　　檢驗(yàn)

　　　　由于大腸菌群指的是具有某些特征的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，即：需氧及兼性厭氧、在37℃能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。因此大腸菌群的檢測(cè)一般都是依照它的定義進(jìn)行。

　　　　國(guó)內(nèi)采用的進(jìn)出口食品大腸菌群檢測(cè)方法主要有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和原國(guó)家商檢局制定的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法在檢測(cè)程序上略有不同。

　　　?。ㄒ唬﹪?guó)度尺度：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)采取三步法，即：乳糖發(fā)酵試驗(yàn)、分別培養(yǎng)和證實(shí)試驗(yàn)。

　　　　乳糖發(fā)酵試驗(yàn)：樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。

　　　　分別培養(yǎng)：將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，36±1℃培養(yǎng)18-24h，觀察菌落形態(tài)。

　　　　證實(shí)試驗(yàn)：挑取平板上的可疑菌落，進(jìn)行革蘭氏染色觀察。同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管36±1℃培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。

　　　　報(bào)告：依據(jù)證實(shí)為大腸桿菌陽性的管數(shù)，查MPN表，報(bào)告每100ml（g）大腸菌群的MPN值。

　　　　具體操作參見GB4789.3-94 《中華國(guó)民共和國(guó)國(guó)家尺度 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群測(cè)定》

　　　?。ǘ┰瓏?guó)家商檢局制定的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，等效采用美國(guó)FDA的標(biāo)準(zhǔn)方法，用于對(duì)出口食品中的大腸桿菌進(jìn)行檢測(cè)。本方法采用兩步法：

　　　　推測(cè)實(shí)驗(yàn)：樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管LST肉湯。36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。

　　　　證實(shí)試驗(yàn)：將產(chǎn)氣管培養(yǎng)物接種煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯管中，36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。以BGLB產(chǎn)氣為陽性。查MPN表，報(bào)告每ml(g)樣品中大腸菌群的MPN值。

　　　　具體操作參見 SN0169-92 《中華國(guó)民共和國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗(yàn)方法》

　　闡明

　　MPN檢索表

　　　　MPN 為Zui大可能數(shù)(Most Probable Number)的簡(jiǎn)稱。這種方法，對(duì)樣品進(jìn)行持續(xù)系列進(jìn)行稀釋，加入培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，從規(guī)定的反映呈陽性管數(shù)的呈現(xiàn)率，用概率論來推算樣品中菌數(shù)Zui近似的數(shù)值。

　　　　MPN檢索表只給了三個(gè)稀釋度，如改用不同的稀釋度，則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)下降或增長(zhǎng)10倍。注意國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中所附MPN表所用稀釋度是不同的，而且成果報(bào)告單位也不雷同。

　　初發(fā)酵和證實(shí)試驗(yàn)

　　　　無論是國(guó)度尺度的三步法還是行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的兩步法，都應(yīng)用了乳糖發(fā)酵管進(jìn)行了兩次發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)基的配制略有不同，但都是為了證實(shí)培養(yǎng)物是否符合大腸菌群的定義，即“在37℃分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣”。

　　　　初發(fā)酵陽性管，不能確定就是大腸菌群細(xì)菌，經(jīng)過證實(shí)試驗(yàn)后，有時(shí)可能成為陰性。有數(shù)據(jù)表明，食品中大腸菌群檢驗(yàn)步驟的符合率，初發(fā)酵與證實(shí)試驗(yàn)相差較大。因此，在實(shí)際檢測(cè)工作中，證實(shí)試驗(yàn)是必須的，顯微鏡報(bào)價(jià)。

　　產(chǎn)氣量與倒管

　　　　在乳糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)工作中，經(jīng)常可以看到在發(fā)酵倒管內(nèi)極微少的氣泡（有時(shí)比小米粒還?。袝r(shí)可以碰到在初發(fā)酵時(shí)產(chǎn)酸或沿管壁有緩緩上浮的吝嗇泡。試驗(yàn)表明，大腸菌群的產(chǎn)氣量，多者可以使發(fā)酵倒管全體充斥氣體，少者可以發(fā)生比小米粒還小的氣泡。假如對(duì)產(chǎn)酸但未產(chǎn)氣的乳糖發(fā)酵如有疑問時(shí)，可以用手輕輕感動(dòng)試管，如有氣泡沿管壁上浮，即應(yīng)斟酌可能有氣體發(fā)生，而應(yīng)作進(jìn)一步試驗(yàn)。

　　挑選菌落

　　　　國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，需要對(duì)初發(fā)酵陽性培養(yǎng)物接種伊紅美藍(lán)平板分離，對(duì)典型和可疑菌落進(jìn)行觀察和證實(shí)試驗(yàn)。由于大腸菌群是一群細(xì)菌的總稱，在平板大腸菌群菌落的色澤、形態(tài)等方面較大腸菌更為龐雜和多樣，而且與大腸菌群的檢出率親密相干。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定伊紅美藍(lán)平板為分離培養(yǎng)基，在該平板上，大腸菌群菌落呈黑紫色有光澤或無光澤時(shí)，檢出率Zui高；紅色、粉紅色菌落檢出率較低。

　　　　另外，挑取菌落數(shù)與大腸菌群的檢出率有親密關(guān)系，只挑取一個(gè)菌落，由于機(jī)率問題，尤其當(dāng)菌落不典范時(shí)，很難避免假陰性的涌現(xiàn)。所以挑菌落一定要挑取典范菌落，如無典范菌落則應(yīng)多挑幾個(gè)，以免呈現(xiàn)假陰性。

　　抑菌劑

　　　　大腸菌群檢驗(yàn)中常用的抑菌劑有膽鹽、十二烷基硫酸鈉、洗衣粉、煌綠、龍膽紫、孔雀綠等。抑菌劑的重要作用是克制其它雜菌，特殊是革蘭氏陽性菌的生長(zhǎng)。

　　　　國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中乳糖膽鹽發(fā)酵管利用膽鹽作為抑菌劑，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中LST肉湯利用十二烷基硫酸鈉作為抑菌劑，BGLB肉湯應(yīng)用煌綠和膽鹽作為抑菌劑。

　　　　抑菌劑雖可克制樣品中的一些雜菌，而有利于大腸菌群細(xì)菌的生長(zhǎng)和挑選，但對(duì)大腸菌群中的某些菌株有時(shí)也產(chǎn)生一些抑制造用。有些抑菌劑用量甚微，稱量時(shí)稍有誤差，即可對(duì)抑菌作用產(chǎn)生影響，因此抑菌劑的添加應(yīng)嚴(yán)格依照標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行。

　　細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定

　　微生物培養(yǎng)方法

　　常見微生物培養(yǎng)基

　　培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和保持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物資、無機(jī)鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養(yǎng)基還含有抗菌素和色素。

　　按所用原料不同，可分為兩類：利用肉湯、馬鈴薯汁等自然成分配制的，稱為自然培養(yǎng)基；運(yùn)用化學(xué)藥品配成并標(biāo)明成分的，稱為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基?；瘜W(xué)試劑中的培養(yǎng)基，大多為合成培養(yǎng)基。由于液體培養(yǎng)基不易長(zhǎng)期保管，現(xiàn)在均改制成粉末。培養(yǎng)基由于配制的原料不同，應(yīng)用請(qǐng)求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì)，因此一般造就基必需防潮、避光、陰涼處保留。對(duì)一些需嚴(yán)厲滅菌的培養(yǎng)基（如組織培養(yǎng)基），較長(zhǎng)時(shí)光的貯存，必需放在2~6。C的冰箱內(nèi)。

　　常見培養(yǎng)基有：

　　1、細(xì)菌培養(yǎng)基

　　配方一 牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基

　　牛肉膏0.3克 ，蛋白胨1.0克，氯化鈉 0.5克，瓊脂 1.5克，

　　水 100毫升

　　在燒杯內(nèi)加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉，用蠟筆在燒杯外作上記號(hào)后，放在火上加熱。待燒杯內(nèi)各組分溶解后，參加瓊脂，不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完整溶解后補(bǔ)足失水，用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)劑pH值到7.2～7.6,分裝在各個(gè)試管里，加棉花塞，用高壓蒸汽滅菌30分鐘。

　　配方二 馬鈴薯培養(yǎng)基

　　取新鮮牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀細(xì)細(xì)剁成肉末后，加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在燒杯上做好記號(hào)，煮沸，轉(zhuǎn)用文火燉2小時(shí)。過濾，濾出的肉末干燥處置，濾液pH值調(diào)到7.5左右。每支試管內(nèi)加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心，滅菌，備用。

　　配方三 根瘤菌培養(yǎng)基

　　葡萄糖 10克 磷酸氫二鉀 0.5克

　　碳酸鈣 3克 硫酸鎂 0.2克

　　酵母粉 0.4克 瓊脂 20克

　　水 1000毫升 1%結(jié)晶紫溶液 1毫升

　　先把瓊脂加水煮沸溶解，然后分辨加入其他組分，攪拌使溶解后，分裝，滅菌，備用。

　　2、放線菌培養(yǎng)基

　　配方一 淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏培養(yǎng)基）

　　可溶性淀粉 2克 硝酸鉀 0.1克

　　磷酸氫二鉀 0.05克 氯化鈉 0.05克

　　硫酸鎂 0.05克 硫酸亞鐵 0.001克

　　瓊脂 2克 水 100毫升

　　先把淀粉放在燒杯里，用5毫升水調(diào)成糊狀后，倒入95毫升水，攪勻后加入其他藥品，使它溶解。在燒杯外做好記號(hào)，加熱到煮沸時(shí)加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解后，補(bǔ)足失水。調(diào)整pH值到7.2～7.4，分裝后滅菌，備用。

　　配方二 面粉瓊脂培養(yǎng)基

　　面粉 60克 瓊脂 20克

　　水 1000毫升

　　把面粉用水調(diào)成糊狀，加水到500毫升，放在文火上煮30分鐘。另取500毫升水，放入瓊脂，加熱煮沸到溶解后，把兩液調(diào)勻，彌補(bǔ)水分，調(diào)整pH值到7.4，分裝，滅菌，備用。

　　3、真菌培養(yǎng)基

　　配方一 薩市（Sabouraud’s）培養(yǎng)基

　　蛋白胨 10克 瓊脂 20克

　　麥芽糖 40克 水 1000毫升

　　先把蛋白胨、瓊脂加水后，加熱，不斷攪拌，待瓊脂溶解后，加入40克麥芽糖（或葡萄糖），攪拌，使它溶解，然后分裝，滅菌，備用。

　　本培養(yǎng)菌是培養(yǎng)很多種類真菌所常用的。

　　配方二 馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基

　　把馬鈴薯洗凈往皮，取200克切成小塊，加水1000毫升，煮沸半小時(shí)后，補(bǔ)足水分。在濾液中加入10克瓊脂，煮沸溶解后加糖20克（用于培養(yǎng)霉菌的加進(jìn)蔗糖，用于培養(yǎng)酵母菌的參加葡萄糖），補(bǔ)足水分，分裝，滅菌，備用。

　　把這培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖還可用來培養(yǎng)放線菌和芽孢桿菌。

　　配方三 黃芽菜汁培養(yǎng)基

　　黃芽菜 100克 瓊脂 15克

　　葡萄糖 20克 水 1000毫升

　　洗凈黃芽菜，加水煮沸30分鐘。用紗布過濾，濾液中加入瓊脂，加熱溶解后放入糖，攪拌使它溶解，補(bǔ)足水分到1000毫升，分裝，滅菌，備用。

　　把這培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2～7.4，可用來培養(yǎng)細(xì)菌和放線菌。

　　配方四 豌豆瓊脂培育基

　　豌豆 80粒 瓊脂 5克

　　水 200毫升

　　取80粒干豌豆加水，煮沸1小時(shí)，用紗布過濾后，在濾液中加入瓊脂，煮沸到溶解，分裝，滅菌，備用。

　　4、食用菌菌種培養(yǎng)基

　　配方一 馬鈴薯?蔗糖--瓊脂培養(yǎng)基

　　20%馬鈴薯煮汁 1000毫升

　　蔗糖 20克 瓊脂 18克

　　把馬鈴薯洗凈去皮后，切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200克，加水1000毫升，煮沸20分鐘后，過濾。在濾汁中補(bǔ)足水分到1000毫升，即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，補(bǔ)足水分，分裝，滅菌，備用。使用該培養(yǎng)基對(duì)pH值要求不嚴(yán)格，可以不測(cè)定。

　　配方二 綜合馬鈴薯培養(yǎng)基

　　20%馬鈴薯煮汁 1000 毫升

　　磷酸二氫鉀 3克 硫酸鎂 1.5克

　　葡萄糖 20克 維生素 10毫克

　　瓊脂 18克

　　先配制20%馬鈴薯煮汁，方式同上。在煮汁中參加上述各種組分，加熱溶解后補(bǔ)足水分，調(diào)劑pH值到6。分裝，滅菌，備用。 該培養(yǎng)基用于培養(yǎng)和保留靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。

　　5.煙草的培養(yǎng)基

　　在植物組織培養(yǎng)時(shí),通過調(diào)節(jié)IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽.CTK/IAA高時(shí),愈傷組織分化芽

　　CTK/IAA低時(shí),分化根;CTK/IAA比例適中保持愈傷組織不分化

　　愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基制備

　　以MS培養(yǎng)基母液為基本,向干凈鋁鍋中次序加入大批元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL ,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培養(yǎng)基后,再加入0.5mg?L-1的BA8mL,0.5mg?L-1的NAA8mL.然后加入實(shí)際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖后攪拌使其溶化,用0.5mol?L-1的NaOH和0.5 mol?L-1的HCl調(diào)整pH值至5.8-6.0.加入14g瓊脂,將鋁鍋置于電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,然后用蒸餾水定容至終體積2L,持續(xù)加熱幾分鐘使之混雜均勻后分裝于三角瓶中.

　　煙草葉片愈傷組織引誘

　　取一無菌培養(yǎng)皿,用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置于無菌培養(yǎng)皿中,并用解

　　剖刀將葉片切成2mm2左右的小片,然后將其接種于籌備好的培養(yǎng)基上,每瓶接種

　　5小片,一共接種6瓶.接種后的三角平置于24條件下黑暗培養(yǎng)1周,然后在同

　　樣溫度下有光照和全黑暗下培養(yǎng)3周直至愈傷組織形成(兩種情況各置3瓶).觀

　　察愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果,統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率.

　　器官分化及植株再生培養(yǎng)

　　將引誘的愈傷組織按類型分辨轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上,置于持續(xù)光照,溫度20-22 C條件下培養(yǎng)3周,統(tǒng)計(jì)愈傷組織再生植株情形.

　　愈傷組織誘導(dǎo)的總體情況

　　煙草愈傷組織引誘培養(yǎng)4周后,愈傷組織基礎(chǔ)形成,即消除因生長(zhǎng)時(shí)間不夠而

　　未形成愈傷的情況.具體情形見表一中所示,6瓶培養(yǎng)物均有愈傷形成,且都未發(fā)

　　生污染,但誘導(dǎo)率幾乎各不相同.其中, 在光照條件下培養(yǎng)的3瓶均勻愈傷誘導(dǎo)率為

　　60.0?, 在黑暗條件下培養(yǎng)的3瓶均勻愈傷誘導(dǎo)率為46.7%.由于實(shí)驗(yàn)進(jìn)程中,外植

　　體即煙草葉片取得偏小,接種時(shí)可能已有部分外植體的大部分細(xì)胞脫水死亡,使整

　　個(gè)實(shí)驗(yàn)的愈傷組織誘導(dǎo)率偏低,愈傷塊偏小.

　　特殊培養(yǎng)基：

　　一 選擇性培養(yǎng)基

　　1酵母菌富集培養(yǎng)基

　　葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化銨0.1% 磷酸二氫鉀0.25% 磷酸氫二鈉0.05% 七水合硫酸鎂0.1% 七水合硫酸鐵0.01% 酵母膏0.05%

　　孟加拉紅0.003% pH4.5

　　2 Ashby無氮培養(yǎng)基 富集好養(yǎng)自生固氮菌

　　甘露醇1% 磷酸二氫鉀0.02% 七水合硫酸鎂0.02% 氯化鈉0.02%

　　二水合硫酸鈣0.01% 碳酸鈣0.5%

　　二 辨別培養(yǎng)基

　　EMB培養(yǎng)基，常用于鑒別E.coli

　　蛋白胨 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氫二鉀2g 伊紅Y 0.4g 美藍(lán)0.065g

　　蒸餾水1000g pH7.2

　　分別海洋微生物的培養(yǎng)基配方

　　2216E培養(yǎng)基配方（固體培養(yǎng)基）

　　蛋白胨 5克

　　酵母膏 1克

　　磷酸高鐵 0.01克

　　瓊脂 15-----20克

　　培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(zhǎng)和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽（酵母產(chǎn)品有幾種分類方法。以人類食用和作動(dòng)物飼料的不同目的可分成食用酵母和飼料酵母。食用酵母中又分成面包酵母、食品酵母和藥用酵母等。

　　面包酵母 又分壓榨酵母、活性干酵母和快速活性干酵母。

　　①壓榨酵母：采取釀酒酵母生產(chǎn)的含水分70～73％的塊狀產(chǎn)品。呈淡黃色,具有緊密的構(gòu)造且易粉碎,有強(qiáng)的發(fā)面才能。在4℃可保躲1個(gè)月左右，在0℃能保躲2～3個(gè)月。產(chǎn)品Zui初是用板框壓濾機(jī)將離心后的酵母乳壓榨脫水得到的，因而被稱為壓榨酵母，俗稱鮮酵母。發(fā)面時(shí)，其用量為面粉量的1～2％,發(fā)面溫度為28～30℃,發(fā)面時(shí)光隨酵母用量、發(fā)面溫度和面團(tuán)含糖量等因素而異，一般為1～3小時(shí)。

　?、诨钚愿山湍?采用釀酒酵母生產(chǎn)的含水分8％左右、顆粒狀、具有發(fā)面能力的干酵母產(chǎn)品。采用具有耐干燥能力、發(fā)酵力穩(wěn)固的醇母經(jīng)培養(yǎng)得到鮮酵母，再經(jīng)擠壓成型和干燥而制成。發(fā)酵后果與壓榨酵母相近。產(chǎn)品用真空或充惰性氣體（如氮?dú)饣蚨趸迹┑匿X箔袋或金屬罐包裝，貨架壽命為半年到1年。與壓榨酵母相比,它具有保藏期長(zhǎng)，不需低溫保藏，運(yùn)輸和使用便利等長(zhǎng)處。

　?、劭焖倩钚愿山湍福阂环N新型的具有快速高效發(fā)酵力的渺小顆粒狀（直徑小于1mm）產(chǎn)品。水分含量為4～6％。它是在活性干酵母的基本上,采用遺傳工程技巧獲得高度耐干燥的釀酒酵母菌株，經(jīng)特別的營(yíng)養(yǎng)配比和嚴(yán)厲的增殖培養(yǎng)條件以及采用流化床干燥裝備干燥而得。與活性干酵母相同,采用真空或充惰氣體保藏,貨架壽命為1年以上。與活性干酵母相比,顆粒較小,發(fā)酵力高,使用時(shí)不需先水化而可直接與面粉混雜加水制成面團(tuán)發(fā)酵，在短時(shí)間內(nèi)發(fā)酵完畢即可焙烤成食品。該產(chǎn)品在本世紀(jì)70年代才在市場(chǎng)上呈現(xiàn)，深受花費(fèi)者的歡迎。

　　食品酵母 不具有發(fā)酵力的滋生才能，供人類食用的干酵母粉或顆粒狀產(chǎn)品。它可通過回收啤酒廠的酵母泥、或?yàn)榱巳祟愷B(yǎng)分的請(qǐng)求專門培養(yǎng)并干燥而得。美國(guó)、日本及歐洲一些國(guó)度在普通的食糧制品如面包、蛋糕、餅干和烤餅中摻入 5％左右的食用酵母粉以進(jìn)步食品的養(yǎng)分價(jià)值。酵母自溶物可作為肉類、果醬、湯類、乳酪、面包類食品、蔬菜及調(diào)味料的添加劑；在嬰兒食品、健康食品中作為食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑。由酵母自溶浸出物制得的5′-核苷酸與味精配合可作為強(qiáng)化食品風(fēng)味的添加劑（見核苷酸類調(diào)味料）。從酵母中提取的濃縮轉(zhuǎn)化酶用作方蛋夾心巧克力的液化劑。從以乳清為原料生產(chǎn)的酵母中提取的乳糖酶，可用于牛奶加工以增添甜度，防止乳清濃縮液中乳糖的結(jié)晶，適應(yīng)不耐乳糖癥的花費(fèi)者的須要。

　　藥用酵母 制作方式和性質(zhì)與食品酵母雷同。由于它含有豐盛的蛋白質(zhì)、維生素和酶等生理活性物資，醫(yī)藥上將其制成酵母片如食母生片，用于治療因不公道的飲食引起的消化不良癥。體質(zhì)虛弱的人服用后能起到一定水平的調(diào)劑新陳代謝性能的作用。在酵母培養(yǎng)進(jìn)程中，如添加一些特別的元素制成含硒、鉻等微量元素的酵母，對(duì)一些疾病具有必定的療效。如含硒酵母用于治療克山病和大骨節(jié)病，并有一定防止細(xì)胞朽邁的作用；含鉻酵母可用于治療糖尿病等。

　　飼料酵母 通常用假絲酵母或脆壁克魯維酵母經(jīng)培養(yǎng)、干燥制成。是不具有發(fā)酵力,細(xì)胞呈死亡狀態(tài)的粉末狀或顆粒狀產(chǎn)品。它含有豐盛的蛋白質(zhì)(30～40％左右)、b族維生素、氨基酸等物質(zhì),普遍用作動(dòng)物飼料的蛋白質(zhì)彌補(bǔ)物。它能增進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，縮短飼養(yǎng)期，增長(zhǎng)肉量和蛋量，改進(jìn)肉質(zhì)和提高瘦肉率，改良皮毛的光澤度，并能加強(qiáng)幼禽畜的抗病才能。包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養(yǎng)基還含有抗菌素和色素。

　　酵母菌的形態(tài)觀察

　　

　　一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)和內(nèi)容

　　目標(biāo)：懂得自然存在的酵母菌及其形態(tài)構(gòu)造。懂得酵母菌發(fā)生子囊孢子的條件及其形態(tài)。

　　內(nèi)容：

　　1．觀察酵母菌個(gè)體形態(tài)。

　　2．察看酵母菌的假菌絲和滋生進(jìn)程。

　　3．觀察自然狀況的酵母菌。

　　二、試驗(yàn)資料和用具

　　釀酒酵母(Saccharomyes cerevisiae)、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)斜面菌種。

　　PDA培養(yǎng)基、麥?zhǔn)?McCLary)培養(yǎng)基(醋酸鈉培養(yǎng)基)、0.05%美藍(lán)染色液(以pH6.0的0.02mol/L磷酸緩沖液配制)、碘液、0.04%的中性紅染色液%孔雀綠，0.5%沙黃液、95%乙醇；

　　顯微鏡、載玻片、擦鏡紙、蓋玻片、接種環(huán)、V形玻璃棒、放置一個(gè)三角形玻璃棒支架的培養(yǎng)皿。

　　三、操作步驟

　　(一)酵母菌形態(tài)觀察

　　1．酵母菌的話體染色視察及逝世亡率的測(cè)定

　　(1)以無菌水洗下PDA斜面培養(yǎng)的釀酒酵母菌苔，制成菌懸液。

　　(2)取0.05%美藍(lán)染色液1滴，置載玻片中心，并用接種環(huán)取酵母菌懸液與染色液混勻，染色2～3min，加蓋玻片，在高倍鏡下觀察酵母菌個(gè)體形態(tài)，區(qū)分其母細(xì)胞與芽體，區(qū)分死細(xì)胞(藍(lán)色)與活細(xì)胞(不著色)。

　　(3)在一個(gè)視野里計(jì)數(shù)死細(xì)胞和活細(xì)胞，共計(jì)數(shù)5～6個(gè)視野。

　　酵母菌死亡率一般用百分?jǐn)?shù)來表現(xiàn)，以下式來盤算：

　　逝世亡率=逝世細(xì)胞總數(shù)÷死活細(xì)胞總數(shù)×100%

　　2．酵母菌液泡系的話體觀察 于干凈載玻片中央加一滴中性紅染色液，取少許上述酵母菌懸液與之混雜，染色5min，加蓋玻片在顯微鏡下觀察。細(xì)胞無色，液泡呈紅色。

　　3．酵母菌細(xì)胞中肝糖粒的觀察 將1滴碘液置于載玻片中心，接人上述酵母菌懸液，混勻，蓋上蓋玻片，顯微鏡觀察，細(xì)胞內(nèi)的貯躲物資肝糖顆粒呈深紅色。

　　4．酵母菌子囊孢子的觀察

　　(1)活化釀酒酵母：將釀酒酵母接種至新穎的麥芽汁培養(yǎng)基上，置28C培養(yǎng)2～3d，然后再移植2～3次。

　　(2)轉(zhuǎn)接產(chǎn)孢培養(yǎng)基：將活化的釀酒酵母轉(zhuǎn)接至醋酸鈉培養(yǎng)基上，置30℃恒溫培養(yǎng)14d。

　　(3)觀察：挑取少許產(chǎn)孢菌苔于載玻片的水滴上，經(jīng)涂片、熱固定后，加數(shù)滴孔雀綠，lmin后水洗，加95%乙醇30S，水洗，Zui后用0.5%沙黃液復(fù)染30S，水洗去染色液，Zui后用吸水紙吸干。制片干燥后，鏡檢，子囊孢子呈綠色，子囊為粉紅色。注意觀察子囊孢子的數(shù)目、外形和子囊的形成率。

　　(4)計(jì)算子囊形成的百分率：計(jì)數(shù)時(shí)隨機(jī)取3個(gè)視野，分離計(jì)數(shù)產(chǎn)子囊孢子的子囊數(shù)和不產(chǎn)孢子的細(xì)胞，然后按下列公式計(jì)算：

　　子囊形成率（%）=3個(gè)視野中形成子囊的總數(shù)

　　÷3個(gè)視野中（形成子囊的總數(shù)+不產(chǎn)孢子細(xì)胞總數(shù)）×100%

　　5．酵母菌假菌絲的觀察 取一無菌載玻片浸于溶化的PDA培養(yǎng)基中，取出放在溫室培養(yǎng)的支架上，待培養(yǎng)基凝固后，進(jìn)行酵母菌劃線接種，然后將無菌蓋玻片蓋在接菌線上(圖12?1)，28℃培養(yǎng)2～3d后，取出載玻片，擦去載玻片下面的培養(yǎng)基，在顯微鏡下直接觀察?？梢姷窖恐辰湍感纬傻呐汗?jié)狀假菌絲，裂殖酵母則形成竹節(jié)狀假菌絲(圖12?2)。

　　6．自然狀況下的酵母菌察看 取一滴美藍(lán)染色液于載玻片中心，春夏秋季取醬油或淹菜上的白膜，冬季取腌酸菜湯上的白膜，將其置于載玻片染色液中，蓋上蓋玻片，顯微鏡下細(xì)心視察酵母菌形態(tài)，出芽生殖，假菌絲等。

　　四、注意事項(xiàng)

　　1．用于活化酵母菌的麥芽汁培養(yǎng)基要新穎、表面濕潤(rùn)。

　　2．在產(chǎn)孢培養(yǎng)基上加大移種量，可進(jìn)步子囊形成率。

　　3．通過微加熱增添酵母的死亡率，易于觀察死亡細(xì)胞。

　　五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告

　　(一)繪圖

　　1．?dāng)?shù)個(gè)酵母菌細(xì)胞，示觀察到的結(jié)構(gòu)。

　　2．?dāng)?shù)個(gè)子囊及子囊孢子形態(tài)圖。

　　(二)記載并計(jì)數(shù)酵母菌的死亡率及子囊形成率(原始記載及計(jì)算結(jié)果)。

　　六、問題和思考

　　1．酵母菌的假菌絲是怎樣形成的?與霉菌的真菌絲有何差別?

　　2．如何差別養(yǎng)分細(xì)胞和開釋出的子囊孢子?

　　3．試設(shè)計(jì)一個(gè)從子囊中分離子囊孢子的試驗(yàn)計(jì)劃。

　　注：

　　酵母菌的簡(jiǎn)易培養(yǎng) 配2%葡萄糖水(或自糖水)，煮沸，裝入三角瓶中(液面高度2～2cm )，加HCl調(diào)至pH3～5放入幾塊葡萄皮（或其他糖分較高的果皮），置5～28℃溫箱中培養(yǎng)2～3d，聞到酒香味后，即可取培養(yǎng)液鏡檢

　　微生物檢驗(yàn)??傾倒平板法

　　

　　用傾倒平板法作為慣例微生物檢驗(yàn)并不很幻想，由于1-2ml的樣品量未必能準(zhǔn)確顯示真正的菌數(shù)。即只有當(dāng)菌數(shù)較高（每毫升大于30）時(shí)，才干得到正確的成果。然后由于過濾艱苦，對(duì)于某些果汁或含果汁飲品還要采取以上方法進(jìn)行微生物檢驗(yàn)作為一般準(zhǔn)則，當(dāng)樣品無法過濾時(shí)才使用傾倒平板法。

　　二、培養(yǎng)基

　　總菌數(shù) 橙血清瓊脂

　　酵母和霉菌數(shù) 橙血清瓊脂（實(shí)用于低PH果汁飲料）

　　大腸菌數(shù) EHDV瓊脂

　　注：所有造就基必需依據(jù)制作商的應(yīng)用闡明進(jìn)行配制和殺菌，由于培育基對(duì)熱敏感，故加熱時(shí)要避免過熱，另外配好的培養(yǎng)基要倒進(jìn)100-120ml瓶或16-18ml試劑管并蓋好，而每個(gè)容器里留存15%空間。

　　三、測(cè)定方法

　　1. 使用前需將裝有培養(yǎng)基的瓶子或試管弄松，然后放在滾水或蒸汽浴里進(jìn)行溶解，要警惕避免培養(yǎng)基過熱變質(zhì)。

　　2. 溶解之后馬上將它們移到47±2℃恒溫水槽里，當(dāng)培養(yǎng)基溫度未降到水槽水溫之前不能拿出來使用。

　　3. 已消毒培養(yǎng)皿的數(shù)目要比所測(cè)樣品的數(shù)目多一個(gè)做空缺對(duì)比。

　　4. 掀起培養(yǎng)皿上蓋，并將樣品用無菌吸管或勺子移入培養(yǎng)皿中。

　　5. 采用火焰消毒無菌操作法打開培養(yǎng)基瓶或試管的蓋子。并往每個(gè)培養(yǎng)皿倒入16-18ml培養(yǎng)基。

　　6. 蓋回上蓋，并沿著8字行路線稍微移動(dòng)培育皿使樣品與培養(yǎng)皿完整混勻。注意勿將培養(yǎng)皿里的造就基賤到到培養(yǎng)皿壁或蓋上。

　　7. 待培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)皿顛倒，并于恰當(dāng)溫度進(jìn)行培養(yǎng)。

　　總菌數(shù) 35℃ 大腸菌數(shù) 35℃ 酵母和霉菌數(shù) 28℃

　　注：①為防止在過濾膜表面形成冷凝水，所有培養(yǎng)皿必須顛倒培養(yǎng)箱中。

　　②在培養(yǎng)箱中放置一燒杯水，以保持恰當(dāng)溫度。

　　8. 橙血清瓊脂上酵母和細(xì)菌是無法用肉眼分辨的，故除非可借助顯微鏡。除霉菌之外都當(dāng)酵母菌計(jì)，大腸菌群色彩紅色。

　　9. 菌落數(shù)的盤算：

　　① 必須分離在培養(yǎng)24h和72h后計(jì)算菌群。點(diǎn)計(jì)所有菌落（不管類型）并記載Zui高數(shù)目。

　?、?酵母?霉菌：在培養(yǎng)48h后計(jì)點(diǎn)霉菌和酵母數(shù)，并在此后每隔24h再計(jì)點(diǎn)一次直到過第三天，記載Zui高數(shù)目。

　　A酵母菌通常為圓形白色菌落，有時(shí)它們也帶顏色，在1～2天后一些酵母菌菌落中心因接收培養(yǎng)劑中唆使劑而成顏色。

　　B霉菌菌落會(huì)顯示不同色彩（包含白、黃、紅、藍(lán)、黑）但以其“絨毛狀”或“棉花狀”外觀很易識(shí)別，通常比細(xì)菌或酵母菌菌落為大。

　　C細(xì)菌菌落通常比酵母菌還快接收唆使劑，而其色彩會(huì)變成藍(lán)綠或褐色。在這種培養(yǎng)劑中細(xì)菌菌落一般比酵母菌小。

　　D大腸桿菌菌落呈綠色或墨汁色，并有的顯金屬光澤。在培養(yǎng)24h，另盤算有“金屬光澤”的菌落。

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