顯微鏡,顯微鏡價(jià)格,顯微鏡的價(jià)格

　　 動(dòng)物細(xì)胞培育試驗(yàn)

　　 細(xì)胞培養(yǎng)是用無(wú)菌操作的方式將動(dòng)物體內(nèi)的組織(或器官)取出，模仿動(dòng)物體內(nèi)的生理?xiàng)l件，在體外進(jìn)行培養(yǎng)．使其不斷地生長(zhǎng)、滋生，人們借以觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)、滋生、細(xì)胞分化以及細(xì)胞朽邁等進(jìn)程的性命現(xiàn)象。

　　細(xì)胞培養(yǎng)的突出長(zhǎng)處，一是便于研討各種物理、化學(xué)等外界因素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育和分化等的影響；二是細(xì)胞培養(yǎng)便于人們對(duì)細(xì)胞內(nèi)構(gòu)造(如細(xì)胞骨架等)、細(xì)胞生長(zhǎng)及發(fā)育等進(jìn)程的觀察。因而細(xì)胞培養(yǎng)是摸索和唆使細(xì)胞性命運(yùn)動(dòng)規(guī)律的—種簡(jiǎn)便易行的實(shí)驗(yàn)技巧，同時(shí)我們也不可疏忽的另一個(gè)因素，那就是它脫離樂(lè)生物機(jī)體后的—些變更。

　　細(xì)胞培養(yǎng)技巧目前已普遍地被利用于生物學(xué)的各個(gè)范疇。如分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、腫痛學(xué)及病毒學(xué)等

　　為此有必要使學(xué)生在細(xì)胞培養(yǎng)方面得到一些初步的感性知識(shí)，懂得動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的根本操作過(guò)程，觀察體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)特征，對(duì)原代細(xì)胞與傳代細(xì)胞有一個(gè)基礎(chǔ)概念。

　　本實(shí)驗(yàn)分兩次進(jìn)行．即清洗與消毒和傳代細(xì)胞的培養(yǎng)與觀察。

　　Ⅰ清洗與滅菌

　　一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)

　　能獨(dú)立地進(jìn)行用于細(xì)胞培養(yǎng)的各種器皿的清洗與消毒，控制干熱滅菌法、濕熱滅菌法和濾過(guò)除菌法的操作，懂得化學(xué)消毒法的使用方式。

　　二、實(shí)驗(yàn)原理

　　清洗與消毒是組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的第一步，是組織培養(yǎng)中工作量Zui大，也是Zui基礎(chǔ)的步驟。體外培養(yǎng)細(xì)胞所使用的各種玻璃或塑料器皿對(duì)干凈和無(wú)菌的請(qǐng)求水平很高。細(xì)胞養(yǎng)不好與清洗不徹底有很大關(guān)系。清洗后的玻璃器皿，不僅要求清潔透明，無(wú)油跡，而且不能殘留任何物質(zhì)。如有毒的化學(xué)物資，哪怕殘留0．1個(gè)，也可能影響細(xì)胞生長(zhǎng)。滅菌手腕的選擇十分主要，對(duì)不同的物品需采取不同的滅菌方法。假如選用的方法不對(duì)，即使到達(dá)了無(wú)菌卻使被滅菌藥品損失了營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、生物學(xué)特征或其他使用價(jià)值也不行。以下在每種滅菌步驟中都先容其使用范疇。

　　三、實(shí)驗(yàn)資料、用品

　　資料：無(wú)臭氧型紫外燈，微孔濾膜(直徑25)：孔徑為0．22μm，微孔濾膜(直徑90)：孔徑為0．22 μm，過(guò)濾器(直徑25)。

　　藥品：70％或75％酒精，0．1％新潔爾滅，煤酚皂溶液(來(lái)蘇兒水)，0．5％過(guò)氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高錳酸鉀，NaOH，鹽酸，重鉻酸鉀，濃硫酸(產(chǎn)業(yè))，DEPC水[體積分?jǐn)?shù)0．1％的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。

　　儀器：超凈臺(tái)，干燥箱，高壓鍋，過(guò)濾器，過(guò)濾泵。

　　四、實(shí)驗(yàn)步驟

　　(一)清洗

　　1．新玻璃器皿的清洗先用自來(lái)水洗擦，再浸泡5％稀鹽酸以中和玻璃表面的堿性物資和其他有害物資。

　　2．使用過(guò)的玻璃器皿的清洗

　　(1)使用過(guò)的培養(yǎng)用品應(yīng)立即浸進(jìn)凈水，避免干枯難洗。

　　(2)用洗滌劑清洗玻璃器皿，自來(lái)水清洗數(shù)遍，顛倒自然干燥。

　　(3)浸酸性洗液過(guò)夜。

　　(4)從酸性洗液撈出后自來(lái)水沖刷10．15次往除殘余酸液，蒸餾水涮洗3次，顛倒烘干。

　　(5)包裝(牛皮紙或一般紙)。

　　(6)高壓(15磅20 min)或干熱(170℃2 h)滅菌。

　　(7)貯存?zhèn)溆谩?

　　3．膠塞的處置

　　(1)新膠塞應(yīng)先用凈水清洗之后再用0．2％NaOH煮沸l(wèi)O-20 min。

　　(2)自來(lái)水清洗10次。

　　(3)再用1％稀鹽酸浸泡30 min。

　　(4)自來(lái)水清洗10次，蒸餾水涮洗3次。晾干，高壓滅菌(見(jiàn)(二)消毒與滅菌)。舊膠塞不必用酸堿處置可直接用洗滌劑煮沸和清洗數(shù)次，過(guò)蒸餾水，晾干，包裝并高壓滅菌后，便可應(yīng)用。

　?。ǘ┫?

　　1．物理消毒法

　　(1)紫外線消毒 用于消毒空氣、操作臺(tái)面和一些不能用干熱、濕熱滅菌的培養(yǎng)器皿，如塑料造就皿、培養(yǎng)板等。這是常應(yīng)用的消毒方式之一。

　　(2)干熱滅菌 重要用于玻璃器皿的滅菌。將用于細(xì)胞培養(yǎng)的器皿放人干燥箱內(nèi)，加熱至160℃，保溫90－120 min。用于RNA提取實(shí)驗(yàn)的用品則需180℃，保溫5－8 h。

　　(3)濕熱滅菌 此辦法也稱(chēng)為高壓蒸汽滅菌，是Zui有效的一種滅菌辦法。重要利用范疇是布類(lèi)、橡膠制品(如膠塞)、金屬器械、玻璃器皿、某些塑料制品以及加熱后不產(chǎn)生沉淀的無(wú)機(jī)溶液(如Hanks液、PBS、20×SSC等)。手動(dòng)高壓滅菌鍋操作如下：

　?、偈紫炔榭锤邏哄亙?nèi)的水是否充分，放人物品蓋好蓋。

　?、诩訜岣邏哄?。將放氣閥打開(kāi)，放氣5—10 min，以消除鍋內(nèi)的冷空氣。

　?、鄞亙?nèi)水沸騰后，落下放氣閥持續(xù)升溫升壓，玻璃器皿等用15磅(121℃)30 min，膠塞、塑料制品、溶液等可用10磅(115 ℃)20 min。調(diào)節(jié)火力大小堅(jiān)持該壓力。

　?、芙Y(jié)束加熱，待壓力自然降落至0再打開(kāi)放氣閥排汽，開(kāi)蓋，取出高壓滅菌的物品烘干。

　　電熱主動(dòng)滅菌鍋使用闡明(型號(hào)：SANYO Autoclave MLS-3020)：

　　①放氣筒加水至LOW程度線處，將與高壓鍋相連的導(dǎo)氣管插進(jìn)放氣筒里，然后將放氣筒回于原位。

　?、诖蜷_(kāi)高壓鍋蓋，參加蒸餾水至高壓鍋底的水位線，水位線位于V型凹槽的1／3－2／3處。

　　③打開(kāi)電源。

　　④設(shè)定高壓溫度及時(shí)光，高壓鍋的溫度規(guī)模為105－121℃，高壓滅菌一般采取121℃20—30 min。

　?、莅汛邏旱奈锲分糜诟邏哄亙?nèi)，順時(shí)針?lè)较驅(qū)xhaust鈕旋至close地位。

　?、薹忾]高壓鍋蓋，旋至顯示屏上左上角的紅亮點(diǎn)剛呈現(xiàn)為止。

　　⑦按start鈕，開(kāi)端高壓，在溫度達(dá)80℃時(shí)顯示器開(kāi)端顯示溫度，當(dāng)溫度到達(dá)所需的設(shè)定溫度時(shí)，在顯示屏的左下角有一長(zhǎng)形的唆使燈閃亮，直到高壓時(shí)光停止后唆使燈滅，此時(shí)蜂叫器報(bào)警一聲。當(dāng)壓力降至0 MPa時(shí)，蜂叫器再報(bào)警一聲。溫度降至80℃時(shí)，蜂叫器報(bào)警10次。顯示屏溫度指導(dǎo)消散，此時(shí)才可打開(kāi)鍋蓋。

　?、嚓P(guān)電源，開(kāi)高壓鍋蓋，取出已滅菌的物品，烘干。

　　(4)濾過(guò)除菌 用于培養(yǎng)用液和各種不能高壓滅菌的溶液的滅菌。采用金屬濾器和小型的塑料濾器，配上可以調(diào)換的微孔濾膜，極大地便利了操作。濾器型號(hào)按直徑大小劃分。如過(guò)濾量大的培養(yǎng)用液常用較大型號(hào)的金屬濾器(直徑90 mm、100 mm、142 mm……等)，配以過(guò)濾泵使用。過(guò)濾量較小的液體常用注射器推進(jìn)的塑料小濾器(直徑20 mm、25 mm等)。濾膜孔徑有0．60 μm、0．45 μm、0．35 μm、0．22 μm、0．10μm等，以0．22 μm除菌Zui為保險(xiǎn)，但對(duì)于較粘稠難濾過(guò)的液體，仍需選用孔徑較大的濾膜。

　?、僭谶^(guò)濾器上裝上微孔濾膜，孔徑為0．22μm。

　?、谟貌及?，濕熱滅菌后使用。

　　2．化學(xué)消毒法

　　常用的消毒液有如下幾種：

　　(1)70％(或75％)酒精：超凈臺(tái)里常備70％酒精棉球(衛(wèi)生級(jí)酒精)，用于手和一些金屬器械或工作臺(tái)面的消毒。

　　(2)0．1％新潔爾滅：主要用于手和前臂的清洗以及工作后超凈臺(tái)面的干凈。超凈臺(tái)旁應(yīng)常備盛有0．1％新潔爾滅溶液的容器及紗布。

　　(3)來(lái)蘇兒水(煤酚皂溶液)：主要用于無(wú)菌室桌椅、墻壁、地面的消毒和清洗，以及空氣噴撒消毒，特殊是污染細(xì)胞的消毒處理。使用濃度請(qǐng)按瓶上闡明。

　　(4)0．5％過(guò)氧乙酸：是強(qiáng)效消毒劑，10 min即可將芽孢菌殺逝世。用于各種物品的表面消毒，用噴撒和擦拭方法進(jìn)行。

　　(5)乳酸蒸氣：將乳酸放入坩鍋內(nèi)用酒精燈或電爐加熱至沸騰為止。將門(mén)窗緊閉1—3 d?？蓪⒖諝庵衅〉奈⑸餁⑺馈?

　　(6)37％甲醛加高錳酸鉀：使用前先緊閉門(mén)窗。將37％甲醛用酒精燈或電爐加熱至沸騰后斷電或滅火。用一張紙盛好適量的高錳酸鉀，敏捷放人已加熱好的甲醛中形成蒸氣。1—3 d后方可到達(dá)消毒空氣的目標(biāo)。

　　3．煮沸消毒 急性消毒可用煮沸法，器械等煮沸15 min后使用。 五、注意事項(xiàng)

　　1．清洗玻璃制品時(shí)，浸酸之后必定要用自來(lái)水沖刷10—15次。由于殘存的洗液對(duì)細(xì)胞粘附有很大影響。清洗塑料制品時(shí)要用棉花或柔軟紗布擦洗。千萬(wàn)不要用硬毛刷，否則侵害塑料表面后細(xì)胞不易貼壁。Tip和Tube必定要用超聲清洗處理后逐個(gè)清洗。如沒(méi)有洗凈會(huì)影響下一次使用的后果。

　　2．干熱滅菌時(shí)，應(yīng)在白天使用烤箱，并不斷觀察，以免產(chǎn)生意外。當(dāng)溫度超過(guò)100℃時(shí)，不能再打開(kāi)烤箱門(mén)。器皿烤完后，待溫度降至100℃之下才干開(kāi)烤箱門(mén)。金屬器械和橡膠、塑料制品不能使用干熱滅菌方法。．

　　3．高壓滅菌后器皿務(wù)必晾干或烘干，以防包裝紙濕潤(rùn)發(fā)霉。

　　4．牛血清、大部分培養(yǎng)基、胰酶和一些生物制劑是有機(jī)溶液，均不能高壓(如TdR，秋水仙素，谷氨酰胺，異硫氰酸胍，MOPS等)。

　　5．濾過(guò)除菌時(shí)，濾器在使用前先裝好濾膜(有時(shí)可在上面加一層定性濾紙)，包好，經(jīng)高壓滅菌后才干使用。濾過(guò)酶類(lèi)制劑時(shí)應(yīng)待濾器溫度降至室溫下再進(jìn)行。過(guò)濾時(shí)壓力不宜過(guò)大，壓力數(shù)字以2為宜。壓力太大時(shí)微孔濾膜可能決裂，或使某些微生物變形而通過(guò)濾膜。裝濾膜時(shí)地位要正確。另外濾器包裝時(shí)，螺釘不要擰得太緊，以防高壓蒸汽不能進(jìn)入，待高壓滅菌之后，再擰緊使用。

　　6．應(yīng)用化學(xué)消毒法時(shí)，配制75％酒精利用衛(wèi)生級(jí)，不要用化學(xué)純、剖析純和優(yōu)質(zhì)純酒精。來(lái)蘇兒水不能用于皮膚消毒，它對(duì)皮膚有刺激性?？諝庀緯r(shí)，所有的物品要事先籌備齊全并使消毒者有較便利的退出道路。由于甲醛或乳酸加熱后放出的蒸氣對(duì)人的角膜和呼吸道上皮有嚴(yán)重的刺激和損害作用。

　　六、思考題

　　1．哪些物品合適于高壓滅菌，并闡明理由。

　　2．紫外線消毒的實(shí)用范疇和目的是什么?

　　II、傳代細(xì)胞培養(yǎng)與觀察

　　一、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)

　　懂得傳代細(xì)胞的傳代方法及操作過(guò)程，學(xué)習(xí)觀察體外培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)及生長(zhǎng)狀態(tài)

　　二、實(shí)驗(yàn)原理

　　傳代培養(yǎng)是指細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶以1：2或1：2以上的比例轉(zhuǎn)移，接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。

　　這種培養(yǎng)，第一步也是制備細(xì)胞懸液，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)成致密單層時(shí)，它很輕易被蛋白水解酶和EDTA)所損壞。所以—般采取胰蛋白酶和EDTA(乙二胺四乙酸鹽)的混雜物，做為消化液。

　　細(xì)胞培養(yǎng)是一種操作繁瑣而又請(qǐng)求十分嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)技巧。要使細(xì)胞能在體外長(zhǎng)期生長(zhǎng)，必需滿(mǎn)足兩個(gè)基礎(chǔ)請(qǐng)求：一是供應(yīng)細(xì)胞存活所必須的條件，如適量的水、無(wú)機(jī)鹽、氨基酸、維生素、葡萄糖及其有關(guān)的生長(zhǎng)因子、氧氣、合適的溫度，注意外環(huán)境酸堿度和滲透壓的調(diào)節(jié)。二是嚴(yán)厲把持無(wú)菌條件。

　　三、試驗(yàn)用品

　　1、器材

　　 解剖剪、解剖鑷、眼科剪(尖頭、彎頭)、眼科鑷(尖頭、彎頭)、培養(yǎng)皿、量筒、試管、錐形瓶、吸管、橡皮頭、培養(yǎng)瓶(小方瓶或中方瓶)等。上述器材均須徹底清洗、烤干、包裝好，9．9xl04Pa(15磅)滅菌30min備用。

　　此外，還有顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)器、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、酒精燈、酒精棉球、碘酒棉球、試管架、標(biāo)志筆、解剖板等。

　　2、試劑

　　L磷酸鹽緩沖液(PBs)

　　無(wú)鈣、鎂溶液

　　細(xì)胞消化液：o．5％胰蛋白酶和o．4%EDTA

　　EMEM液

　　3%谷氨酰胺

　　o．5％臺(tái)盤(pán)藍(lán)染液等

　　3、資料

　　喉癌細(xì)胞

　　四、實(shí)驗(yàn)辦法

　　 在做傳代細(xì)胞培養(yǎng)之前，首先將培養(yǎng)瓶置于顯微鏡下，觀察培養(yǎng)瓶中細(xì)胞是否已長(zhǎng)成致密單層，如已長(zhǎng)成單層，即可進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)。

　　1.營(yíng)養(yǎng)液配制:

　　EMEM液 90%

　　犢牛血清 10%

　　雙抗(1萬(wàn)單位／m1) 加至約100單位／m1

　　3％谷氛酞胺 1m1

　　7．4％NaHCO3 調(diào)pH至6．8—7．0

　　2．換液:

　　在酒精燈旁打開(kāi)瓶塞，倒往瓶中的細(xì)胞養(yǎng)分液。

　　3.消化與分裝

　　在上述瓶中參加1mlEDTA溶液，輕輕動(dòng)搖，將溶液倒出。反復(fù)上述動(dòng)作。參加適量消化液（0.02%EDTA或0.04％EDTA1ml十o．5％胰蛋白酶液0.2ml）以蓋滿(mǎn)細(xì)胞為宜，置于室溫，停留1—2min后，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，肉眼觀察細(xì)胞單層是否涌現(xiàn)縫隙(針孔大小的空隙)，如涌現(xiàn)縫隙，即可倒往消化液；如末呈現(xiàn)縫隙，則可將瓶翻回，持續(xù)進(jìn)行消化，直到涌現(xiàn)縫隙為讓。此時(shí)，可倒去消化液，加入新配制的營(yíng)養(yǎng)液20m1。然后用吸管汲取培養(yǎng)瓶中的營(yíng)養(yǎng)液，重復(fù)奏樂(lè)瓶壁上的細(xì)胞層至瓶壁細(xì)胞全體脫落下來(lái)為止。此時(shí)，可持續(xù)輕輕地奏樂(lè)細(xì)胞懸液，以使細(xì)胞散開(kāi)。隨之進(jìn)行分裝。

　　4．造就

　　分裝好的細(xì)胞瓶上，做好標(biāo)記，注明細(xì)胞代號(hào)、日期。置于培養(yǎng)架上，輕搖使細(xì)胞均勻散布，以免堆積成團(tuán)。然后置于37℃培養(yǎng)。

　　5.觀察

　　(1)視察體外培養(yǎng)細(xì)胞的幾個(gè)問(wèn)題；

　　細(xì)胞培養(yǎng)24h后，即可進(jìn)行觀察，觀察的重點(diǎn)如下：

　　A.首先要察看培育細(xì)胞是否污染。重要視察造就液色彩的變更及混濁度

　　B.察看培育姬色彩變更及細(xì)胞是否生長(zhǎng)。

　　C.如細(xì)胞已生長(zhǎng)，則要觀察細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)并斷定其所處的生長(zhǎng)階段，麥克奧迪。觀察時(shí)可參照(2)的描寫(xiě)進(jìn)行。

　　D．察看完畢，可用臺(tái)盤(pán)藍(lán)染液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。以斷定逝世、活細(xì)胞的比例。

　　(2)細(xì)胞的生長(zhǎng)階段及其形態(tài)特點(diǎn)

　　傳代培養(yǎng)的細(xì)胞需逐日進(jìn)行觀察，注意細(xì)胞有無(wú)污染，培養(yǎng)液色彩的變化及細(xì)胞生長(zhǎng)的情形?！阒袑优囵B(yǎng)的細(xì)胞，從培養(yǎng)開(kāi)端，經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)、繁殖、朽邁及死亡的全過(guò)程。它是一個(gè)持續(xù)的生長(zhǎng)過(guò)程，但為了觀察及描寫(xiě)，人為地將具分為5個(gè)時(shí)代，但各期間無(wú)顯明盡對(duì)界線?，F(xiàn)分辨描寫(xiě)如下：

　　A．游離期：當(dāng)細(xì)胞經(jīng)消化疏散成單個(gè)細(xì)胞后，由于細(xì)胞原生質(zhì)的壓縮相表面張力以及細(xì)胞膜的彈性。所以，此時(shí)細(xì)胞多為圓形，折光率高，此期可延續(xù)數(shù)h。

　　B．吸附期(貼壁)：由于細(xì)胞的附壁持性，細(xì)胞懸液靜置培養(yǎng)一段時(shí)光(約7—8h)后，便附著在瓶壁上(此期不同細(xì)胞所需時(shí)間不同)。在顯微鏡下觀察時(shí)可見(jiàn)瓶壁上有各種形態(tài)的細(xì)胞，如圓形、扁形、短菱形。細(xì)胞的特色，大多立體感強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)顆粒少，透明。

　　C.繁殖期：培養(yǎng)l2h以后直到72h，細(xì)胞進(jìn)進(jìn)滋生期，加速了細(xì)胞生長(zhǎng)和決裂。此期包含由幾個(gè)細(xì)胞形成的細(xì)胞島(即由少數(shù)細(xì)胞緊密湊集而出現(xiàn)的孤立細(xì)胞群，常散在地散布在瓶壁上)，到細(xì)胞展?jié)M全部瓶壁(即所謂形成細(xì)胞單層)的進(jìn)程。此期細(xì)胞形態(tài)為多角形(浮現(xiàn)上皮樣細(xì)胞的特點(diǎn))。細(xì)胞特色：透明，顆粒較少，細(xì)胞間界線明白，并可模糊見(jiàn)到細(xì)胞核。依據(jù)細(xì)胞所占瓶壁有效面積的百分率，又可將其生長(zhǎng)狀態(tài)分為四級(jí)。以“十”的多少表現(xiàn)如下：

　　十：細(xì)胞占瓶壁有效面積(也就是細(xì)胞能生長(zhǎng)的瓶壁面積)的25％以?xún)?nèi)有新生細(xì)胞。一般要視察3—5個(gè)視野內(nèi)的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，然后加以綜合剖析斷定。

　　十十：細(xì)胞占瓶壁有效面積的25—75％以?xún)?nèi)具新生細(xì)胞。

　　十十十：細(xì)胞占瓶壁有效面積的75—95％具新生細(xì)胞。細(xì)胞排列致密。但仍有空隙。

　　十十十十：細(xì)胞占瓶壁95％以上，細(xì)胞已長(zhǎng)滿(mǎn)或接近長(zhǎng)滿(mǎn)單層，細(xì)胞致密，透明度好。

　　從十十一十十十十為細(xì)胞的對(duì)數(shù)增加期(或稱(chēng)為指數(shù)增加期)。 D．保持期：當(dāng)細(xì)胞形成良好單層后，細(xì)胞的生長(zhǎng)與決裂都減緩，并逐漸結(jié)束生長(zhǎng)，這種現(xiàn)象被稱(chēng)為細(xì)胞生長(zhǎng)的接觸克制。此時(shí)細(xì)胞界線逐漸含混，細(xì)胞內(nèi)顆粒逐漸增多，且透明度下降，立體感較差。由于代謝產(chǎn)物的不斷積聚，保持液逐漸變酸。此時(shí)養(yǎng)分液已變?yōu)槌赛S色或黃色。

　　E．衰退期：由于溶液中養(yǎng)分的減少和日齡的增加，以及代謝產(chǎn)物的累積等因素，此時(shí)細(xì)胞間可呈現(xiàn)空隙，細(xì)胞中顆粒進(jìn)一步增多，透明度更低，立體感很差。若將細(xì)胞經(jīng)固定染色處置后，可見(jiàn)細(xì)胞中有大而多的脂肪滴及液泡。Zui后，細(xì)胞皺縮，逐漸逝世亡，從瓶壁上脫落下來(lái)。


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