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　　潘氏實驗

　　簡介

　　潘氏試驗是指腦脊液中的蛋白測定，也稱球蛋白定性試驗，其原因是腦脊液在病變時，蛋白有不同水平的增添，多為球蛋白增長，在潘氏試驗中球蛋白遇酚而變性，涌現(xiàn)沉淀而成陽性。

　　潘氏試驗

　　潘氏試劑的配制：在熱的200ml蒸餾水中加入10ml苯酚（石碳酸），強力混雜后，放置37攝氏度48小時。

　　應用時放置室溫，汲取其上清液10ml于12*100mm的試管中，滴入一滴腦脊液，在黑色背景下觀察其是否有白色沉淀，而叛定陰陽性。

　　臨床意義

　　正常腦脊液含有極微量的蛋白質(zhì)，其中以白蛋白為主，潘氏試驗為陰性反響?；撔阅X膜炎，結核性腦膜炎及顱內(nèi)出血等，均見蛋白質(zhì)增添，且多為球蛋白增長，潘氏試驗呈陽性反映。

　　第十章 腦脊液檢查

　　

　　第二節(jié) 化學檢查

　　一、腦脊液潘氏試驗意義 陽性見于各種腦膜炎、腦炎、腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔阻塞和出血、多發(fā)性神經(jīng)炎、變形性脊椎病等。

　　二、腦脊液葡萄糖測定意義

　　1. 增卓識于：糖尿病、乙型腦炎、病毒性腦膜炎、脊髓灰質(zhì)炎、腦卒中、腦腫瘤等。

　　2. 下降見于：化膿性腦膜炎、結核性腦膜炎、真菌性腦膜炎、蛛網(wǎng)膜下腔出血、原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性腦膜腫瘤等。

　　三、腦脊液氯化物測定意義

　　1. 結核性腦膜炎、化膿性腦膜炎、真菌性腦膜炎、脊髓灰質(zhì)炎、中毒性腦炎、腦腫瘤等腦脊液中氯化物有不同水平減少。

　　2. 尿毒癥、腎炎、漿液性腦膜炎時可增添。 腦脊液白細胞分類計數(shù)

　　化驗先容：此檢討在某些疾病的辨別診斷上有主要意義。白細胞總數(shù)正常時，一般不做白細胞分類。如超過正常數(shù)值，則需做白細胞分類。腦脊液中白細胞為中性粒細胞、淋巴細胞和內(nèi)皮細胞（包含單核細胞）三類。

　　　　臨床意義：

　　　　在白細胞超過正常值、對其進行分類后，可有以下幾種情況。

　　　?。?）中性粒細胞增多：常見于急性細菌性沾染或慢性感染急性發(fā)作時。還可見于脊髓灰質(zhì)炎早期結核性腦膜炎早期。

　　　　（2）淋巴細胞增多：常見于結核性腦膜炎、化膿性腦膜炎經(jīng)過治療后，以及布氏桿菌

　　性腦膜炎、腦膿腫和腦膜鄰近感染、腦和腦膜的病毒性感染、霉菌感染、立克次體感染、螺旋體感染、疫苗接種后或感染后腦脊髓炎，也可見于寄生蟲沾染、脫髓鞘病、腦瘤、結節(jié)病和白塞氏綜合征等

　　　　參考值：0－8個/mm3

　　一、蛋白質(zhì)定性檢討（潘氏球蛋白定性試驗）

　　1、潘氏球蛋白定性試驗原理 腦脊液中蛋白質(zhì)重要是球蛋白與苯酚聯(lián)合，可形成不溶性蛋白鹽而下沉，發(fā)生白色混濁或沉淀。

　　2、試劑

　　5%苯酚溶液：取純苯酚25ml，加蒸餾水至500 ml，用力振搖，放置37℃溫箱內(nèi)1~2天，待完整溶解后，置棕色瓶內(nèi)保留。

　　飽和苯溶液：取苯酚10 ml，加蒸餾水至100 ml，充足混勻，置進37℃溫箱中數(shù)小時，見底層有酚析出，上層即為飽和酚溶液。避光保留，一般置棕色瓶內(nèi)保留。

　　3、操作 取試劑2~3 ml，置于小試管中，用毛細滴管滴進腦脊液1~2滴，在玄色背景下立即察看成果。

　　4、結果斷定

　　陰性（－）：無混濁，清楚透明，不顯霧狀。

　　極弱陽性（±）：微呈白霧狀，對光不易看到，在玄色背景下才干看到。

　　弱陽性（+）：呈灰白色白霧狀。

　　陽性（++）：呈白色薄云霧狀混濁。

　　強陽性（+++）：呈白色絮狀沉淀或白色濃云塊狀。

　　Zui強陽性（++++）：立即形成白色凝塊。

　　5、方法學評價 潘氏（Pandy）試驗所需標本量少，操作簡略，結果觀察較為明白，臨床試驗室常用此法。但該方法過于敏感，有一部分正凡人也可涌現(xiàn)極弱陽性（±）結果。

　　6、注意事項

　　（1）紅細胞過多時，須先離心使細胞沉淀，汲取上清液進行試驗。

　?。?）試驗中所用試管應十分干凈，否則易呈現(xiàn)假陽性結果。

　　（3）所用試劑苯酚如不純，亦可引起假陽性反映；室溫低于10℃，酚飽和度低，亦可引起假陽性成果。

　　7、正常參考值 正常腦脊液中蛋白質(zhì)含量僅是血漿蛋白的1/200，即0.2~0.4g/L，其成分以白蛋白為主，故蛋白定性實驗成果為陰性或極弱陽性（±）。

　　8、臨床意義 有腦組織和腦膜疾患時常呈陽性反響，如化膿性腦膜炎、結核性腦膜炎、梅毒性中樞神經(jīng)體系疾病、脊髓灰白質(zhì)炎、風行性腦炎等。腦出血時多呈強陽性反映，如外傷性血液混入腦脊液中，亦可呈陽性反響。

　　李凡他試驗

　　李凡他試驗先容：

　　　　

　　　　李凡他試驗是作為差別滲出液和漏出液Zui重要，Zui常用的辦法之一。臨床上一般用于鑒別胸水及腹水是否炎癥的一項慣例檢查，陽性(+)表現(xiàn)積液為滲出液，陰性(-)表現(xiàn)積液為漏出液。

　　李凡他試驗正常值：

　　　　 　　暫無考證。

　　李凡他試驗臨床意義：

　　　　 　　異常結果：陽性和陰性分辨有不同的病癥，陽性時滲出液由炎癥引起，常見于感染性、非感染性因素，有時可見于惡性腫瘤。陰性是漏出液屬非炎癥性，基礎形成原由于：血漿膠體滲透壓下降，血管內(nèi)壓力增高，淋巴管阻塞等。

　　　　須要檢查的人群：存在漿膜腔積液的人群。

　　第八章 漿膜腔積液檢驗

　　

　　試驗一 漿膜腔積液理學檢討

　　【目標】 控制漿膜腔積液(serous cavity fluid)理學檢查的內(nèi)容和方式。

　　【原理】 因漏出液與滲出液的產(chǎn)活力制不同，故各種體液的色彩、透明度、凝固性等也有不同，可以通過肉眼和感觀的方式差別。

　　【器材】 比重計、比重筒。

　　【標本】 漿膜腔穿刺液。

　　【操作】

　　1．觀察顏色 以肉眼觀察漿膜腔積液色彩變更。滲出液混濁，可呈深淺不同的黃色、紅色、乳白等顏色；漏出液多為淡黃色，稀薄透明，根據(jù)觀察到的顏色如實描寫報告。

　　2．觀察透明度 察看時可輕搖標本，以肉眼觀察漿膜腔積液透明度的變更。漏出液清楚透明；滲出液可呈現(xiàn)不同濁度，如“微渾”、“渾濁”等，依據(jù)視察到的透明度如實描寫報告。

　　3．觀察凝固性 傾斜漿膜腔積液試管，肉眼視察有無凝塊形成，結果可根據(jù)標本情形不同用“無凝塊”、“有凝塊”報告，滲出液常有凝塊，而漏出液一般無凝固性。

　　4．測定比密 充足混勻的漿膜腔積液遲緩倒入比重筒中，以能懸浮起比重計為宜。將比重計輕輕放進裝有漿膜腔積液的筒中并加以捻轉(zhuǎn)，待其靜置自由懸浮于漿膜腔積液中(勿使其接觸比重筒壁)，讀取液體凹面相重合的比重計上的標尺刻度數(shù)值并作記載。

　　【參考值】

　　1．外觀 漏出液為淺黃色清晰透明或微混；滲出液為黃色、黃綠色、紅色、咖啡色等不同的色彩，混濁。

　　2．比密 漏出液＜1.015；滲出液＞1.015。

　　【注意事項】

　　1．器材 堅持比重計清潔、刻度精確，測定比密后，應立即浸泡、清洗清潔，以免蛋白質(zhì)凝固在比重計上，影響正確性。如標本量少，可采取折射儀測定比密。

　　2. 標本 漿膜腔積液標本一般分裝在2支試管內(nèi)送檢：一管作細胞學檢查，為避免標本凝固引起細胞變性損壞而影響結果，應加100mg/ml乙二胺四乙酸二鈉或二鉀抗凝，每 0.1ml可抗凝6ml標本；另一管不加抗凝劑，用以察看有無凝固現(xiàn)象。

　　3．斷定結果

　　（1）當標本顏色或透明度轉(zhuǎn)變不顯明或難以觀察時，可在試管后以白色或黑色為背景，燈光下細心觀察。

　?。?）標本呈黃色一般為滲出液，多見炎癥性積液，呈云霧狀混濁樣，甚至呈膿性，凝固性高、比密增高；淺黃色透明的標本一般為漏出液，清晰或微混、一般無凝固。

　　（3）當標本中含有大批的纖溶酶時，可將纖維蛋白溶解，使?jié)B出液看不到凝塊，應聯(lián)合其它試驗剖析標本情形。

　　4．妥當處置殘余標本 檢驗完畢后余留的標本和所用的器皿應按《臨床試驗室廢物處置原則》（S/T/49）的規(guī)定處置，以免造成污染。

　　實驗二 漿膜腔積液顯微鏡檢查

　　【目標】 控制漿膜腔積液顯微鏡檢查，包含有核細胞計數(shù)和分類的內(nèi)容、方式。

　　【原理】 根據(jù)漿膜腔積液中的各種細胞形態(tài)特色，通過計算必定量體積的漿膜腔液體內(nèi)細胞數(shù)或者將標本染色分類計數(shù)，盤算出漿膜腔積液中各種細胞的數(shù)目或百分比。

　　【器材】

　　1．試管、試管架。

　　2．吸管、吸耳球。

　　3．微量吸管、膠吸頭、干脫脂棉。

　　4．玻棒。

　　5． 改進Neubauer計數(shù)板、蓋玻片、綢布。

　　6．顯微鏡。

　　【試劑 】

　　1． 冰乙酸、白細胞稀釋液。

　　2． 瑞氏染液或瑞?吉染液。

　　【標本】 漿膜腔穿刺液。

　　【操作】

　　（一）有核細胞計數(shù) 方法與腦脊液雷同，如細胞數(shù)較多的利用稀釋法進行檢查。

　　1．直接計數(shù)法 實用于有核細胞數(shù)不高的清楚透明或微渾的漿膜腔液。

　　（1）往除紅細胞：在小試管內(nèi)放入冰乙酸1～2滴，轉(zhuǎn)動試管，使內(nèi)壁黏附少許冰乙酸后傾往。滴加混勻漿膜腔液3～4滴，混勻，放置數(shù)分鐘損壞紅細胞。

　?。?）充池：用微量吸管吸取漿膜腔液（混勻破壞紅細胞后）充入2個計數(shù)池。

　　（3）計數(shù)：靜置2～3min后，低倍鏡計數(shù)2個計數(shù)池內(nèi)四角和中心大方格共10個慷慨格內(nèi)的有核細胞數(shù)。

　　（4）盤算：10個慷慨格內(nèi)有核細胞總數(shù)即每微升漿膜腔液的有核細胞數(shù)，再換算成每升漿膜腔液的有核細胞數(shù)。

　　2．稀釋計數(shù)法 實用于渾濁的漿膜腔積液。

　　（1）稀釋并損壞紅細胞：根據(jù)標本內(nèi)有核細胞多少情形。用白細胞稀釋液對標本進行?定倍數(shù)稀釋混勻，放置數(shù)分鐘，破壞紅細胞。

　?。?）充池：用微量吸管汲取漿膜腔液（混勻稀釋后）充入1個計數(shù)池。

　　（3）計數(shù)：靜置2～3min后，低倍鏡計數(shù)1個計數(shù)池內(nèi)的四角和中心大方格共5個大方格內(nèi)的細胞總數(shù)。

　?。?）計算：依據(jù)5個慷慨格內(nèi)的有核細胞總數(shù)和稀釋倍數(shù)盤算每升漿膜腔積液的有核細胞數(shù)。

　　（二）有核細胞分類

　　1．直接分類法 有核細胞計數(shù)后以低倍鏡改變?yōu)楦弑剁R，直接在高倍鏡下根據(jù)細胞形態(tài)和細胞核形態(tài)進行分類，共分類計數(shù)l00個有核細胞，分辨計數(shù)單個核細胞(包括淋巴細胞、單核細胞及間皮細胞)和多個核細胞(粒細胞)的百分率。若白細胞數(shù)不足l00個，則直接寫出單個核細胞和多個核細胞具體數(shù)。

　　2．涂片染色分類法 在抽出穿刺液后立即以1 000r/min離心5min，取沉淀物制成均勻的薄片，置于室溫下或37℃恒溫箱內(nèi)敏捷干燥，瑞氏或瑞?吉染色后油鏡分類計數(shù)100個有核細胞。一般標本中可見淋巴細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞等。作腫瘤細胞檢查時利用巴氏或HE染色檢查。

　　【注意事項】

　　1．細胞計數(shù)及分類計數(shù)

　?。?）必要時可采取細胞玻片離心沉淀儀收集細胞，以進步白細胞分類計數(shù)的正確性。

　　（2）作細胞形態(tài)學檢查及分類的涂片一般不少于5張，以備查找腫瘤細胞，必要時同時制備厚片，涂片干燥前可用乙醚乙二醇等量混雜，固定30min。

　?。?）有核細胞計數(shù)及染色分類計數(shù)，應包含粒細胞、淋巴細胞、單核細胞和間皮細胞。分類進程中若發(fā)明間皮細胞和不能分類的異常細胞應另外描寫，并作HE、巴氏染色查找腫瘤細胞。

　　2．方法選擇

　　（1）有核細胞分類計數(shù)誤差大，尤其是陳腐性、細胞變形的標本，故推舉采用涂片染色分類法計數(shù)。

　　（2）血細胞分析儀實用于血性積液的檢測．其他積液可采取流式原理的尿液剖析儀檢測

　　3．結果剖析 常用于漏出液與滲出液的辨別。漏出液中有核細胞常＜300×106/L，滲出液常＞500×106/L。見表8-1。

　　表8-1 漿膜腔積液特色及可能原因

　　漿膜腔積液特色

　　可能原因

　　以多形核白細胞為主

　　化膿性炎癥或早期結核性積液

　　嗜酸性粒細胞增多

　　結核性滲出液

　　淋巴細胞增多

　　提醒慢性炎癥。如結核性滲出液、病毒沾染、SLE的多發(fā)性漿膜炎

　　以間皮細胞及組織細胞增多為主

　　提醒漿膜上皮脫落茂盛，如淤血、惡性腫瘤等

　　心包積液有核細胞＞1 000×106/L

　　提示心包炎

　　腹水有核細胞＞500×106/L，中性粒細胞＞50%

　　提醒細菌性腹膜炎

　　癌細胞

　　診斷惡性腫瘤

　　試驗三 漿膜腔積液粘蛋白定性試驗

　　【目標】 控制漿膜腔液粘蛋白定性(rivalta test , 李凡他試驗)的辦法。

　　【原理】 漿膜腔液漏出液中，只有微量的粘蛋白，李凡他實驗為陰性。當炎癥時漿腹腔上皮細胞被刺激，分泌粘蛋白增多。粘蛋白是一種酸性糖蛋白，等電點pH為3～5，因此，可在稀乙酸中呈現(xiàn)白色沉淀。

　　【器材】

　　1． 100m1量筒。

　　2． 滴管、膠吸頭。

　　【試劑】

　　1． 冰乙酸。

　　2． 蒸餾水。

　　【標本】 漿膜腔穿刺液。

　　【操作】

　　1．加試劑 在100m1量筒加入2～3滴冰乙酸，再加l00ml蒸餾水，充分混勻（pH3～5），靜置數(shù)分鐘，偏光顯微鏡報價。

　　2．加標本 將漿膜腔積液靠近量筒液面垂直逐滴輕輕滴下。

　　3．觀察結果 立即在黑色背景下觀察有無白色云霧狀沉淀天生及其降落程度。

　　4．判定結果 見表8-2。

　　表8-2 漿膜腔液粘蛋白定性結果判定

　　結果

　　斷定根據(jù)

　　陰性

　　清晰不顯霧狀

　　陽性

　　(土)

　　漸呈白霧狀

　　(+)

　　參加標本即涌現(xiàn)白霧狀

　　(++)

　　白薄云狀

　　(+++)

　　白濃云狀

　　5． 報告方法 陰性或陽性（陽性水平根據(jù)表8-2報告）。

　　【注意事項】

　　1．標本 血性漿膜腔積液經(jīng)離心沉淀后，用上清液進行檢查。

　　2．器材與試劑

　?。?）量筒的高度與蒸餾水的量要足夠。

　　（2）依據(jù)漏出液重要成分制備基本液，在其中參加不同量的粘蛋白作為陽性對比。

　?。?）在量筒中參加冰乙酸及蒸餾水后應充足混勻，否則會發(fā)生假陰性。

　　3．pH 保證pH3～5的酸堿度，加冰乙酸不宜過多，以免pH闊別漿膜粘蛋白的等電點發(fā)生假陰性。

　　4．結果判定

　　（1）加入標本后立即在玄色背景下細心視察結果。如渾濁顯明，下沉遲緩，中途消散者為陰性。

　?。?）標本中球蛋白含量增高時試驗可呈假陽性，必要時可進行辨別試驗，辦法是先將標本滴入未加冰乙酸的蒸餾水中觀察，如有白色云霧狀沉淀，此乃球蛋白不溶于水所致。

　　5．結果分析 常用于漏出液與滲出液的鑒別。漏出液常陰性，滲出液常陽性。

　　6．本試驗是一種初步的簡易篩檢試驗，對區(qū)分滲出液與漏出液特異性意義不高。


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