顯微鏡,顯微鏡價(jià)格,顯微鏡的價(jià)格

　　 一、細(xì)胞程度上的研究技術(shù)

　　(一)光學(xué)顯微鏡技術(shù) 光學(xué)顯微鏡技術(shù)(1ight microscopy，LM)是一種常用技術(shù)，為了觀察某種細(xì)胞和組織，將其取下后，用必定的藥品(單一的或按配方混雜的)固定，使組織中的蛋白質(zhì)敏捷凝固，以盡可能保留其自然結(jié)構(gòu)，而后經(jīng)一系列的處置，將其包埋在石蠟、火棉膠中，用切片機(jī)將組織切成薄片(一般是5～10um)。若是石蠟包埋，則應(yīng)先脫掉切片上的蠟，然后染色，在顯微鏡下觀察。Zui常用的染料是蘇木精(hematoxylin)和伊紅(eosin)(簡(jiǎn)稱(chēng)H-E)。蘇木精是具有陽(yáng)離子的堿性染料，可以和組織中陰離子基團(tuán)親和形成鹽，故凡被蘇木精染成藍(lán)紫色的結(jié)構(gòu)和物質(zhì)則稱(chēng)為嗜堿性物質(zhì)。伊紅是具有陰離子的酸性染料，可以和組織中陽(yáng)離子基團(tuán)親和形成鹽，故凡被伊紅染成紅色的結(jié)構(gòu)或物質(zhì)，則稱(chēng)為嗜酸性物資。對(duì)酸性或堿性染料親和力均不強(qiáng)者，則稱(chēng)為中性物質(zhì)。

　　此外，還可以把組織直接放于低溫下凍結(jié)，然后直接切片、染色，制成標(biāo)本以便鏡下察看，該種程序能較好的保留酶的活性，且程序簡(jiǎn)便、快速，故常用于酶的組織化學(xué)研討及病理的快速診斷。

　　血液(或體液等)可直接涂在玻片上(涂片法)進(jìn)行觀察。一些軟組織(如疏松結(jié)締組織、神經(jīng)組織等)可以撕開(kāi)展在玻片上(展片法)進(jìn)行觀察。堅(jiān)硬的骨、牙組織，可以磨成薄片(磨片法)進(jìn)行觀察。

　　(二)幾種特別顯微鏡

　　1．相差顯微鏡(phase contrast microscope) 未染色的標(biāo)本不能接收光線(xiàn)，一般光學(xué)顯微鏡下觀察這種細(xì)胞的結(jié)構(gòu)是艱苦的，觀察活細(xì)胞的微細(xì)結(jié)構(gòu)通常要采取相差顯微鏡，其原理是通過(guò)物鏡里的相板和聚光鏡上增添了環(huán)狀光闌，把透過(guò)標(biāo)本的可見(jiàn)光的光程差(相位差)變成振幅差，從而進(jìn)步細(xì)胞內(nèi)各結(jié)構(gòu)之間的對(duì)照度，使未染色的活組織和細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)變得更清楚。

　　顛倒相差顯微鏡(inverted phase contrast microscope) 物鏡在物臺(tái)下，透鏡向上，而光源在物臺(tái)上，光向下射。該種鏡實(shí)用于對(duì)培育瓶(皿)內(nèi)的活細(xì)胞進(jìn)行觀察。

　　2．暗視野顯微鏡(dark-field microscope) 也能對(duì)未染色的資料浮現(xiàn)顯明對(duì)照。其原理是應(yīng)用特別的暗視聚光器，遮往中心光束的照明，從側(cè)面來(lái)的光照耀標(biāo)本，視野暗，而標(biāo)本中顆粒所產(chǎn)生的衍射光或散射光進(jìn)進(jìn)物鏡，出現(xiàn)出亮點(diǎn)，且十分清楚。因此，可用來(lái)觀察未染色的活細(xì)胞和膠體粒子，以及某些細(xì)胞器，如線(xiàn)粒體、細(xì)胞核等。

　　3．熒光顯微鏡(fluorescence microscope) 一般是用高壓汞燈發(fā)生的紫外線(xiàn)為光源，熒光物質(zhì)受波長(zhǎng)較短的紫外線(xiàn)照耀后，可以激發(fā)出波長(zhǎng)較長(zhǎng)的可見(jiàn)光，后者的波長(zhǎng)有賴(lài)于發(fā)射物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)。有些物資對(duì)某種熒光染料有特異親和力，如DNA能聯(lián)合吖啶橙，呈黃色或黃綠色熒光，RNA與吖啶橙結(jié)合后則產(chǎn)生橘黃或橘紅色熒光。聯(lián)合熒光物資的抗體與抗原結(jié)合后，也可以用熒光顯微鏡觀察。

　　(三)一般組織化學(xué)技術(shù) 用顯微鏡和化學(xué)分析兩者結(jié)合的方法在切片上研究組織或細(xì)胞內(nèi)化學(xué)成分的技術(shù)稱(chēng)為組織化學(xué)(histochemistry)或細(xì)胞化學(xué)。組織化學(xué)可以準(zhǔn)確檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)某一化學(xué)成分的性質(zhì)和散布(即定性和定位)，也可以借助儀器進(jìn)行定量。如欲檢測(cè)細(xì)胞和組織內(nèi)的多糖類(lèi)，可用過(guò)碘酸希夫反映(periodic acid Schiff reaction，PAS反響)，多糖經(jīng)高碘

　　酸(HIO4)氧化成多醛，多醛的醛基與無(wú)色的Schiff試劑(無(wú)色品紅)結(jié)合成為紫紅色沉淀物，沉淀物部位則表現(xiàn)多糖存在的部位(圖1-1，式1，2)。

　　再如，欲檢測(cè)細(xì)胞或組織內(nèi)的酸性磷酸酶，在酸性條件下，使底物在細(xì)胞或組織中的酸性磷酸酶催化下分解，發(fā)生磷酸根，后者再與參加的鉛化合物的鉛離子聯(lián)合，再被硫化銨置換成玄色的硫化鉛沉淀，玄色沉淀部位即表現(xiàn)酶存在的部位(圖1-2)。

　　

　　用組織化學(xué)技術(shù)可以檢測(cè)細(xì)胞或組織內(nèi)的糖類(lèi)、脂類(lèi)、蛋白及酶類(lèi)等。

　　(四)免疫組織化學(xué)技術(shù) 這是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新技術(shù)，它應(yīng)用抗體和抗原特異結(jié)合的原理，來(lái)檢測(cè)細(xì)胞或組織的多肽或蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)。這種物質(zhì)即為抗原，用它免疫動(dòng)物可以制備抗該種物質(zhì)的抗體(抗血清)，也可以用該物質(zhì)制備單克隆抗體，將這種抗體用熒光染料、鐵蛋白或辣根過(guò)氧化物酶等標(biāo)記，然后用標(biāo)志的抗體處理組織切片，標(biāo)記抗體同組織或細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原特異性結(jié)合，因而，在組織切片上浮現(xiàn)有標(biāo)記物或酶解產(chǎn)物的有色沉淀(酶標(biāo)記的部位)，即抗原(多肽或蛋白質(zhì))存在的部位。用上述標(biāo)記的抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合的辦法，稱(chēng)為直接法。另一種是間接法：先用某抗原的抗體(第一抗體)作為抗原，免疫另一種動(dòng)物，制備抗體的抗體，稱(chēng)抗抗體(第二抗體)，然后對(duì)第二抗體進(jìn)行標(biāo)志。欲測(cè)組織或細(xì)胞中某種抗原，先以相應(yīng)的抗體(第一抗體)處置，抗原與抗體特異結(jié)合，而后用標(biāo)志的抗抗體(第二抗體)處理，它特異地同第一抗體結(jié)合，Zui后顯色，鏡檢，顯色的部位即是抗原存在的部位。

　　目前Zui常用的免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry)辦法，有過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶復(fù)合物法(peroxidase-anti-peroxidase complex method，PAP法)和抗生物素蛋白-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物法(avidin-biotin-peroxidase complex method，ABC法)，這兩種方法均屬間接法。

　　1．PAP法 重要原理是第一抗體同抗原特異結(jié)合，第二抗體既能同第一抗體結(jié)合，又能同PAP復(fù)合物結(jié)合。后者是由過(guò)氧化物酶和抗過(guò)氧化物酶抗體所組成，Zui后顯色反映。該法較直接法和一般間接法敏銳。

　　 2．ABC法 這是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的方法，其重要原理是第一抗體同抗原特異結(jié)合，已結(jié)合生物素(biotin)的第二抗體再同第一抗體結(jié)合。由于一個(gè)分子的抗生物素蛋白(avidin)可以同4個(gè)生物素結(jié)合，Zui后用結(jié)合生物素的過(guò)氧化物酶和抗生物素蛋白復(fù)合物處置，使復(fù)合物同第二抗體(已結(jié)合生物素)結(jié)合，顯色后，凡顯色的部位即表明抗原存在的部位。該方法比PAP法敏銳20—40倍(圖1-3)。

　　(五)細(xì)胞培養(yǎng)和組織培養(yǎng) 將人體或動(dòng)物體的細(xì)胞或組織在無(wú)菌的條件下于合適的溫度、pH、充分的養(yǎng)分進(jìn)行體外造就稱(chēng)細(xì)胞造就和組織培育(cell culture and tissue culture)。這樣，細(xì)胞或組織可以存活。假如將細(xì)胞進(jìn)行克隆(clone)(從一個(gè)細(xì)胞決裂而來(lái))純化，而且能穩(wěn)固的傳代及存活下往，這種細(xì)胞群體稱(chēng)為細(xì)胞系(cell line)。由于細(xì)胞系是由一個(gè)親本細(xì)胞決裂增殖而來(lái)，故細(xì)胞系的每一個(gè)細(xì)胞同親本細(xì)胞的生物特征雷同。目前國(guó)內(nèi)外樹(shù)立了很多種動(dòng)物和人類(lèi)的正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞系，如Hela細(xì)胞系(人宮頸腺癌細(xì)胞)、Eca-109細(xì)胞系(人食管癌細(xì)胞系)、BEL-7402細(xì)胞系(人肝癌細(xì)胞)等，這給試驗(yàn)研究供給了有用的資料。如用肝細(xì)胞系來(lái)研究肝細(xì)胞的代謝，可避免用整體肝研究肝細(xì)胞時(shí)肝內(nèi)其他細(xì)胞對(duì)肝細(xì)胞功效的影響，使所得成果單一可靠。該種技術(shù)是研究性命科學(xué)的一種主要手腕，廣泛運(yùn)用于細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)和腫瘤學(xué)等研究。近些年來(lái)，人們利用細(xì)胞造就、細(xì)胞雜交(兩種不同細(xì)胞的融會(huì))方法，做出了不少成就，增進(jìn)了性命科學(xué)的發(fā)展。

　　二、亞細(xì)胞程度上的研究技術(shù)

　　(一)透射電子顯微鏡技巧 電子顯微鏡與光學(xué)顯微鏡不同，它是以電子束取代光源，以磁場(chǎng)取代透鏡，進(jìn)行聚焦和放大，Zui后將物體的影象投射到熒光屏或照相底片上。依據(jù)辨別率公式：R＝K×λ／NA(K＝常數(shù)0．61，λ：波長(zhǎng)，NA：鏡口率)，電子束波長(zhǎng)甚短，故電鏡可極大的進(jìn)步辨別率和放大率，目前電鏡的分辯率可達(dá)0.2-0.3nm，可放大幾十萬(wàn)倍。

　　由于電子易被物體散射和接收，所以組織切片必需非常薄，一般約10～20nm。欲檢測(cè)的組織需先經(jīng)藥品固定，樹(shù)脂包埋，重金屬鹽處理，然后在超薄切片機(jī)上用玻璃刀或鉆石刀切成超薄切片。用透射電子顯微鏡(transmission electron microscopy，TEM)觀察標(biāo)本時(shí)，電子經(jīng)過(guò)被重金屬鹽所染的部位，電子被散射的多，則熒光屏上顯得暗，圖象較黑，稱(chēng)電子致密，反之，則稱(chēng)為電子透明(圖1-4)。

　　

　　電壓在500kV以上的電子顯微鏡，稱(chēng)超高壓電子顯微鏡，其電子束可透過(guò)較厚的超薄切片。

　　(二)掃描電子顯微鏡技術(shù) 掃描電子顯微鏡技巧(scanning electron microscopy，SEM)可以用來(lái)視察細(xì)胞或組織表面，斷面和鑄型的構(gòu)造，在顯示表面形態(tài)時(shí)，先將其固定，后在其表面噴鍍金或碳，用掃描電子顯微鏡觀察(圖1—4)。

　　 (三)冷凍蝕刻 冷凍蝕刻(freeze etch)又稱(chēng)冷凍蝕刻復(fù)型(freezeetch replica)。該辦法扼要進(jìn)程如下：①固定和冷凍掩護(hù)：取材固定后，轉(zhuǎn)移到甘油中，甘油浸進(jìn)組織，可維護(hù)組織避免冷凍時(shí)呈現(xiàn)人工假象。②冷凍：將組織切成小塊，浸入液氮凍結(jié)。③劈裂：高真空下將組織劈裂。④蝕刻：使溫度略微上升，使劈裂表面冰晶升華，從而涌現(xiàn)自然的凸凹現(xiàn)象。⑤復(fù)型：以必定角度向表面噴鍍一層薄的鉑膜，以垂直方向噴一層碳，加固鉑膜。⑥清算復(fù)型及電鏡察看；消化組織取下復(fù)型，用透射電子顯微鏡視察。固然觀察的標(biāo)本并非組織本身，而是劈裂面的鉑復(fù)型。用此方式可以觀察細(xì)胞膜內(nèi)部?jī)蓪又|(zhì)分子間的構(gòu)造(圖1-5)。

　　三、分子程度上幾種重要研討技巧

　　(一)放射性核素和放射自顯影 用放射性核素作示蹤原子，標(biāo)記某種氨基酸或其他化合物，可以追蹤一些物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的合成和其代謝道路，如14C標(biāo)記的氨基酸可以追索蛋白質(zhì)的合成，3H-胸苷摻入構(gòu)成細(xì)胞核的DNA，可以研究其細(xì)胞周期等。將攝入放射性物質(zhì)的細(xì)胞或組織，做成切片，或?qū)⑵淠骋怀煞址謩e電泳，利用射線(xiàn)對(duì)感光乳膠的作用，曝光后，經(jīng)顯影、定影后，有放射性核素標(biāo)記的物質(zhì)處，浮現(xiàn)玄色銀粒，可用肉眼、光鏡或電鏡進(jìn)行觀察。

　　(二)分子原位雜交 根據(jù)核酸分子上堿基互補(bǔ)原則，在DNA和RNA互補(bǔ)鏈之間進(jìn)行特異性雜交，此稱(chēng)為分子原位雜交(in situ hybridization)。借此，可以對(duì)組織切片和玻片上的培育細(xì)胞的核酸片斷進(jìn)行檢測(cè)和定位。雜交有兩種類(lèi)型：即對(duì)細(xì)胞核內(nèi)的DNA雜交和對(duì)胞質(zhì)內(nèi)的RNA雜交。用已知核酸片斷［如互補(bǔ)DNA(cDNA)]作為探針，將其標(biāo)記上放射性核素、熒光素或結(jié)合過(guò)氧化物酶的生物素，在原位上對(duì)細(xì)胞和組織內(nèi)特異的mRNA和rRNA以及DNA(預(yù)先在pH8條件下處理標(biāo)本，使DNA雙鏈裂開(kāi))進(jìn)行雜交，放射自顯影或直接用熒光顯微鏡觀察或酶解底物，出現(xiàn)色彩反映。該方法定位準(zhǔn)確，簡(jiǎn)便快速，故普遍運(yùn)用于細(xì)胞生物學(xué)、組織學(xué)和胚胎學(xué)。該方法除斷定細(xì)胞內(nèi)特異的mRNA種類(lèi)外，還有以下用處：①測(cè)定濃縮染色體上DNA序列的定位。②測(cè)定細(xì)胞間期細(xì)胞核內(nèi)常染色質(zhì)上功效結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。③一條染色體上某一區(qū)段的核酸序列的肯定。④測(cè)定微量病毒顆粒。⑤對(duì)糖蛋白和多肽激素合成的細(xì)胞內(nèi)定位等(圖1-6)。

　　 四、定量分析術(shù)

　　在組織、細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分定性研究的基本上，對(duì)其定量研究是性命科學(xué)發(fā)展中所必須的，故定量剖析技術(shù)的利用日趨普遍。

　　(一)顯微分光光度定量術(shù) 依據(jù)細(xì)胞或組織內(nèi)某種物質(zhì)含量不同，染色深淺不一，對(duì)必定波長(zhǎng)的光接收不同，利用顯微分光光度計(jì)(microspeetrophotometer)對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定量測(cè)定。由于消光度與物質(zhì)的厚度和濃度成正比，將消光度經(jīng)過(guò)一系列的光電組合體系轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，將其放大，測(cè)出光密度值進(jìn)行定量分析。對(duì)運(yùn)用組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)、放射自顯影和原位雜交術(shù)制造的標(biāo)本，均可利用其進(jìn)行定量分析。

　　(二)形態(tài)計(jì)量術(shù) 是應(yīng)用幾何學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)原理，肽視察細(xì)胞或組織中獲得的二維平面，推導(dǎo)出三維立體定量的方式。這種研究物體內(nèi)某種結(jié)構(gòu)韻立體數(shù)值之科學(xué)稱(chēng)為體視學(xué)(stereology)。通常利用圖象剖析儀(image analyzer)將察看標(biāo)本通過(guò)攝象機(jī)顯示于監(jiān)示器屏幕上，并依據(jù)不同構(gòu)造的色彩深淺(灰度)及各象點(diǎn)的大小、地位，測(cè)定出其體積、表面積、周長(zhǎng)、均勻厚度、數(shù)目、散布等參數(shù)，使形態(tài)學(xué)的研討更有可比價(jià)值。

　　(三)流式細(xì)胞術(shù) 將受檢細(xì)胞制成懸液，再用熒光染色，然后使這種單細(xì)胞懸液快速通過(guò)流式細(xì)胞計(jì)(flow cytometry)的激光照耀小區(qū)，將每個(gè)細(xì)胞發(fā)生的熒光信號(hào)變成電信號(hào)，輸進(jìn)盤(pán)算機(jī)內(nèi)，即可測(cè)得該組細(xì)胞中不同細(xì)胞的數(shù)目、熒光強(qiáng)度、細(xì)胞體積及細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的含量等參數(shù)。由于該方式速度快、準(zhǔn)確度高，已普遍利用于細(xì)胞周期、DNA、RNA、抗體、受體等方面之剖析。

　　胚胎移植，核移植


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