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　　一、正定型法

　　【目標(biāo)】控制用鹽水介質(zhì)法進(jìn)行ABO血型體系(ABO group)正定型(directtyping)的原理、操作方式和結(jié)果判斷?！驹怼坑靡阎腎gM類特異抗體（標(biāo)準(zhǔn)血清）與被檢紅細(xì)胞在室溫條件下、鹽水介質(zhì)中反應(yīng)，依據(jù)紅細(xì)胞是否涌現(xiàn)凝集現(xiàn)象來測定被檢紅細(xì)胞膜上有無與血型抗體相對應(yīng)的抗原，從而判斷和鑒定被檢者的血型。

　　【器材】1.小試管、記號筆、蠟筆、試管架。2.尖滴管、膠吸頭。3.吸管、吸耳球。4.載玻片或有凹槽的玻璃板或白瓷板。5.離心機(jī)。6.顯微鏡。

　　【試劑】1．標(biāo)準(zhǔn)抗A、抗B血清（商品）分為人血清ABO血型抗體和人ABO血型單克隆抗體，請求如下：（1） 人血清ABO血型抗體：①特異性高。②凝集效價：抗A不低于1∶128 ，抗B不低于1∶64。③親和力：反應(yīng)開端15s內(nèi)即呈現(xiàn)凝集，3min時顯明凝集，血凝塊大于1mm2。④穩(wěn)固性高。⑤已滅活補(bǔ)體。（2）人ABO血型單克隆抗體：①特異性：抗A抗體特異凝集具有A型紅細(xì)胞抗原的A1、A2、A1B、A2B；抗B抗體只凝集含B抗原的B和AB型紅細(xì)胞。②親和力：以開端反應(yīng)到涌現(xiàn)凝集的時光表現(xiàn)抗血清的親和力，國度標(biāo)準(zhǔn)是抗A對A1、A2、A2B分離為15s、30s、45s；抗B對B型紅細(xì)胞為15s。③凝集效價：國度標(biāo)準(zhǔn)是抗A1、抗B均大于1∶128。④穩(wěn)固性：較人血清抗體的穩(wěn)固性低。2．生理鹽水。

　　【標(biāo)本】抗凝靜脈血或末梢血。

　　【操作】

　　制備被檢者5％紅細(xì)胞生理鹽水懸液：抗凝血離心或紅細(xì)胞自然沉降后取試管下層的紅細(xì)胞2滴于小試管中，參加生理鹽水2ml，用尖滴管將紅細(xì)胞與生理鹽水充足混勻。2 500r/min離心3 min后棄往上清液，反復(fù)洗滌3次。自管底汲取1滴壓積紅細(xì)胞加進(jìn)19滴生理鹽水中混勻，此即為5％的紅細(xì)胞生理鹽水懸液。操作示看法圖4-1。圖4-15％紅細(xì)胞生理鹽水懸液制備操作示意圖

　　玻片法

　?。?）標(biāo)志玻片或白瓷板：取干凈的載玻片或白瓷板1塊，用蠟筆畫出小格，標(biāo)明抗A、抗B。

　?。?）加標(biāo)準(zhǔn)抗血清：在玻片或白瓷板已標(biāo)記的區(qū)域內(nèi)分離滴加抗A、抗B標(biāo)準(zhǔn)抗血清各l滴。

　　（3）加被檢紅細(xì)胞懸液：在滴加抗A、抗B標(biāo)準(zhǔn)抗血清的小格中分離加被檢者5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液各1滴；不斷輕輕轉(zhuǎn)動玻片或白瓷板，使血清與紅細(xì)胞充足混勻，持續(xù)約1～5 min，室溫放置15～30min。

　?。?）視察結(jié)果：肉眼視察有無凝集(或溶血)反映，再用低倍鏡觀察，判定陰性、陽性和陽性強(qiáng)度。

　?、?凝集判定標(biāo)準(zhǔn)：如紅細(xì)胞呈均勻散布，無凝集顆粒，顯微鏡下紅細(xì)胞疏散存在，無凝集靠攏現(xiàn)象為陰性；紅細(xì)胞呈現(xiàn)凝集為陽性。

　?、谀瘡?qiáng)弱水平斷定標(biāo)準(zhǔn)：有助于發(fā)明A、B亞型，類B抗原。在低倍鏡下判定標(biāo)準(zhǔn)見表4-1、圖4-2。

　　表4-1

　　紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度 判斷標(biāo)準(zhǔn)凝集水平 判斷標(biāo)準(zhǔn)

　　4+ 紅細(xì)胞凝集成一大塊， 血清清楚透明

　　3+ 紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊， 血清尚清楚

　　2+ 紅細(xì)胞凝塊疏散成很多小塊， 四周可見到游離紅細(xì)胞

　　1+ 肉眼可見大顆粒， 四周有較多的游離紅細(xì)胞

　　± 鏡下可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起， 四周有很多游離紅細(xì)胞混雜凝集外觀(mixedfield，MF)

　　鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而盡大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈疏散散布

　　－ 陰性鏡下未見細(xì)胞凝聚， 紅細(xì)胞均勻散布

　　表4-2ABO血型鑒定成果斷定

　　正定型（標(biāo)準(zhǔn)血清+被檢者紅細(xì)胞） 被檢者血型反定型（標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞+被檢者血清）

　　抗A 抗B A型紅細(xì)胞 B型紅細(xì)胞 O型紅細(xì)胞

　?。?－ A － ＋ －

　?。?＋ B ＋ － －

　?。?＋ AB － － －

　　－ － O ＋ ＋ －

　　圖4-3ABO血型鑒定結(jié)果判斷

　?。?）報告方法：正定血型（玻片法） X型。

　?。?）操作示看法圖4-4。圖4-4ABO血型鑒定正定型玻片法操作示意圖


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