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　?。ㄒ唬?a href="http://m.hkxccw.cn/product/dianzixianweijing/" title="電子顯微鏡" class="sitelink">電子顯微鏡的種類

　　電子顯微鏡是以電子束作光源、電磁場作透鏡、具有高辨別率和放大倍率的顯微鏡。電鏡通過收集、收拾和分析電子與樣品相互作用發(fā)生的各種信息而獲得物體的形貌和構(gòu)造等。電鏡的類型也是應(yīng)用電子信號的不同和成像的不同而進行分類。重要分為透射電子顯微電鏡、掃描電子顯微電鏡、剖析電子顯微鏡和高壓電子顯微鏡。

　　1、 透射電子顯微電鏡

　　透射電子顯微電鏡，是發(fā)展Zui早、利用Zui普遍的電鏡，一般所說的電鏡指的便是透射電鏡。透射電鏡重要用于視察組織細胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。

　　透射電鏡由三大系統(tǒng)組成，包含鏡系統(tǒng)統(tǒng)、真空系統(tǒng)和電子線路體系。鏡系統(tǒng)統(tǒng)是電鏡的主體，結(jié)構(gòu)相當(dāng)龐雜，又分為照明系統(tǒng)、成像系統(tǒng)和觀察記載系統(tǒng)。

　　照明體系由電子槍和聚光鏡組成，電子槍發(fā)射電子作為電鏡的照明光源。在電鏡中電子射線在幾萬伏的加速電壓作用下產(chǎn)生了短波長高能電子束，加速電壓越高，電子束的波長越短，電鏡的分辯率就越高。聚光鏡則將來自電子槍的電子束會聚在樣品上并可調(diào)節(jié)照明強度等。

　　成像系統(tǒng)由樣品室、物鏡、中間鏡和投影鏡組成，是電鏡具有高放大倍率和高分辯率的要害部位，主要是借助轉(zhuǎn)變各個透鏡的電流來獲得不同的放大倍率。成像系統(tǒng)的總放大倍率是物鏡、中間鏡和投影鏡放大倍數(shù)的乘積。

　　觀察記載系統(tǒng)包括觀察室和底片室。觀察室內(nèi)有一個熒光屏，電子束穿透樣品，帶有樣品信息的電子經(jīng)成像系統(tǒng)放大投影到觀察室的熒光屏上，激發(fā)熒光屏發(fā)出可見光，透過的電子多熒光屏亮，反之則暗，熒光屏的亮、暗水平與樣品微細結(jié)構(gòu)逐一對應(yīng)，終極產(chǎn)生具有必定反差的影象。圖像的保存可通過熒光屏下的底片室內(nèi)的膠片感光，使圖像拍攝下來，也可將圖片通過探頭輸送到盤算機中經(jīng)打印機打出圖片。

　　電鏡有龐雜的真空體系和電路系統(tǒng)以保持鏡筒的高真空狀況和穩(wěn)固的工作條件。

　　2、 掃描電子顯微鏡

　　掃描電子顯微鏡，簡稱掃描電鏡。掃描電鏡應(yīng)用二次電子信號成像，用于觀察樣品表面形貌，圖像具有立體感。

　　掃描電鏡的光源部分與透射電鏡雷同，是由電子槍發(fā)生電子射線經(jīng)聚光鏡聚焦形

　　成一束極細的光斑稱為電子探針。電子探針受掃描產(chǎn)生器把持，在樣品表面進行逐點掃描，把樣品表面的原子外層的電子擊出，形成二次電子，二次電子被二次電子檢測器收集、轉(zhuǎn)換、放大、轉(zhuǎn)換到顯象管，由于顯象管的熒光屏上的畫面與樣品被電子束照耀面呈嚴(yán)厲同步掃描，逐點逐行逐一對應(yīng)，這樣就能看出樣品表面形貌。

　　二次電子發(fā)射越多的處所，在像上相應(yīng)的點就越亮，反之則暗。由于二次電子發(fā)生的多少與電子束進射角度有關(guān)，也就是與樣品表面的起伏有關(guān)，所以熒光屏上得到的圖像反映了樣品表面的立體形貌。

　　3、 分析電子顯微鏡

　　剖析電子顯微鏡，簡稱分析電鏡，是一種帶有特別附件波譜儀或能譜儀的電子顯微鏡。它可以裝配在透射電鏡上，也可以裝配在掃描電鏡上。當(dāng)高速活動的電子會聚成電子束（探針）打到樣品上時，所激發(fā)出來的X射線波長是和樣品內(nèi)所含元素的原子序數(shù)親密相干的。把特點性X射線依據(jù)其波長和強度分辨加以收集便可推知樣品內(nèi)包括哪些成分及各元素的含量。

　　應(yīng)用剖析電鏡可以在察看樣品形貌的同時懂得渺小區(qū)域（如某一細微構(gòu)造）內(nèi)所含元素的種類及其含量，在細胞超微結(jié)構(gòu)程度上對其內(nèi)部的化學(xué)元素成分進行定位、定性、定量分析。從而獲知結(jié)構(gòu)變更與其組成的元素變更的關(guān)系，它的分辯率很高，元素周期表上大部分元素都能辨別出來。

　　4、 高壓電子顯微鏡

　　高壓電子顯微鏡，指加速電壓在120KV以上的透射電子顯微鏡，若加束電壓在500KV以上稱為超高壓電鏡。目前世界上超高壓電鏡Zui高的加速電壓可達3000 KV。

　　高壓電子顯微鏡的重要特色是辨別本事高，對樣品的穿透才能強，可用于察看較厚的樣品，整體培育的細胞不需超薄切片即可視察內(nèi)部的三維微細構(gòu)造，如微絲、微管等，在偏振鏡下可浮現(xiàn)三維排列的圖象特色。但電鏡體積宏大，價錢昂貴，難以普及。

　?。ǘ╇婄R樣品制備技術(shù)

　　電鏡樣品制備技術(shù)較龐雜，種類也較多，分為普通樣品制備技術(shù)和特別樣品制備技術(shù)。這里簡略先容幾種常用的樣品制備技術(shù)。

　　1、超薄切片技術(shù)

　　超薄切片技巧是透射電鏡樣品制備方式中Zui基礎(chǔ)的一種。由于電子束穿透才能的限制透射電鏡察看的樣品必需很薄，普通光鏡切片厚度約3～5μm，而透射電鏡切片厚度則請求在50～80nm左右。這種薄切片稱為超薄切片。超薄切片技術(shù)包含：取材、固定、脫水、浸透、包埋、切片及染色。

　　電鏡樣品采取戊二醛和鋨酸雙重固定，用酒精或丙酮脫水，環(huán)氧樹脂進行包埋，

　　超薄切片機切片，采取重金屬如鈾和鉛進行染色以增添細胞結(jié)構(gòu)間的反差。

　　2、負染色技術(shù)

　　負染色技術(shù)又稱陰性染色，是透射電鏡樣品制備技術(shù)中的一種。此技術(shù)是指通過重金屬鹽在樣品四周堆積而增強樣品外周的電子密度，使樣品顯示負反差，烘托出樣品的形態(tài)和大小。常用的重金屬有磷鎢酸鈉、醋酸鈾等。

　　負染色技術(shù)主要用于細菌、病毒、噬菌體等微生物大分子結(jié)構(gòu)、亞細胞碎片以及分別的細胞器等研討工作。負染色樣品不需經(jīng)過固定、脫水包埋和超薄切片等復(fù)雜操作，而是直接對沉降的樣品勻漿懸浮液進行染色。

　　3、冷凍蝕刻技巧

　　冷凍蝕刻技術(shù)又稱冷凍復(fù)型，是透射電鏡樣品制備技術(shù)的一種，是將樣品經(jīng)快速冷凍→斷裂→升華→噴鉑→噴碳而終極形成一層印有生物樣品斷裂面立體結(jié)構(gòu)的復(fù)型膜，然后將生物樣品腐化掉，用銅網(wǎng)將復(fù)型膜撈起進行透射電鏡觀察。

　　冷凍蝕刻技巧能堅持細胞本來的結(jié)構(gòu)，立體感鮮明，主要用于生物膜的研討。

　　4、掃描電鏡樣品制備技術(shù)

　　掃描電鏡合適于研討生物樣品的表面特點，樣品制備包含視察面的裸露、固定、脫水、干燥和導(dǎo)電等。

　　樣品制備采用戊二醛和鋨酸雙重固定；乙醇或丙酮脫水。干燥是掃描電鏡樣品較

　　主要的步驟。由于生物樣品柔軟多水，大多數(shù)的組織含水量在80%以上，采用自然干燥，會受表面張力影響使細胞表面壓縮，形態(tài)轉(zhuǎn)變。所以多采取液體CO2臨界點干燥法，在臨界狀況時表面張力系數(shù)為零，也就是分子的內(nèi)聚力即是零時干燥，細胞不再壓縮，堅持了原有的形態(tài)。由于干燥樣品不導(dǎo)電，因而須要在樣品表面鍍一層薄薄的金屬膜使樣品導(dǎo)電并增添圖像的反差和立體感。


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